BspQI
BspQI рекомбинанттуу түрдө E. coliде көрсөтүлүшү мүмкүн, алар белгилүү бир сайттарды тааный алат жана төмөнкү астында өндүрүлөт.
BspQI, IIs чектөөчү эндонуклеаза чектөөчү эндонуклеаза, Bacillus sphaericusдан клондоштурулган жана өзгөртүлгөн BspQI генин алып жүрүүчү рекомбинантты E. coli штаммынан алынган.Ал белгилүү бир сайттарды тааный алат жана таануу ырааттуулугу жана бөлүнүү жерлери төмөнкүдөй:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Продукт өзгөчөлүктөрү
1. Жогорку активдүүлүк, Тез сиңирүү;
2. Төмөн жылдыз активдүүлүгү, "скальпель" сыяктуу так кесүүнү камсыз кылуу;
3. BSA жана жаныбарлардан алынбаган;
Метилдөө сезгичтиги
Dметилденүү:Сезимтал эмес;
Dсм метилдөө:Сезимтал эмес;
CpG метилизациясы:Сезимтал эмес;
Сактоо шарттары
Продукт ≤ 0℃ жөнөтүлүшү керек;-25~-15℃ шартта сактаңыз.
Сактоочу буфер
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 μg/ml Рекомбинант альбумин, 0.1% Trition X- 100 жана 50% глицерин (pH 7.0 @2).
Бирдиктин аныктамасы
Бир бирдик 1 мкг Ички башкаруу ДНКсын 1 сааттын ичинде 50°C жалпы реакция көлөмү 50 мкл сиңирүү үчүн зарыл болгон ферменттин көлөмү катары аныкталат.
Сапатты көзөмөлдөө
Белоктун тазалыгынын анализи (SDS-PAGE):BspQI тазалыгы SDS-PAGE талдоо менен аныкталган ≥95% болгон.
RNase:10U BspQI 1,6μg MS2 РНКсы менен 50℃ температурада 4 саат бою агароз гелинин электрофорези менен аныкталгандай деградацияны бербейт.
Спецификалык эмес DNase активдүүлүгү:10U BspQI 1μg λ ДНК менен 50℃ 16 саат бою, 50℃ 1 саатка салыштырганда, агароз гел электрофорези менен аныкталгандай ашыкча ДНКны бербейт.
Лигация жана кайра кесүү:1 мкг λДНКны 10U BspQI менен сиңиргенден кийин, ДНК фрагменттерин 16ºCде T4 ДНК лигазасы менен байласа болот.Жана бул ligated фрагменттерин BspQI менен recut болот.
E. coli ДНК: E. coli 16s рДНКга мүнөздүү TaqMan qPCR аныктоо E.coli геномунун калдыктары ≤ 0.1pg/ul экенин көрсөттү.
Хост протеининин калдыгы:≤ 50 промилле
Бактериялык Эндотоксин: LAL-тест, Кытай фармакопеясынын IV 2020 басылышына ылайык, гелдин чегин текшерүү ыкмасы, жалпы эреже (1143).Бактериялык эндотоксин мазмуну ≤10 ЕС/мг болушу керек.
Реакция системасы жана шарттары
| Компонент | Көлөм |
| BspQ I(10 U/мкл) | 1 мкл |
| ДНК | 1 мкг |
| 10 x BspQ I буфери | 5 мкл |
| dd H2O | 50 мкл чейин |
Реакция шарттары: 50℃, 1~ 16 ч.
Жылуулукту инактивациялоо: 80°C 20 мүнөт.
Сунушталган реакция системасы жана шарттары салыштырмалуу жакшы фермент сиңирүү эффектин камсыздай алат, бул маалымат үчүн гана, чоо-жайын билүү үчүн эксперименталдык натыйжаларды караңыз.
Продукт колдонуу
Чектөө эндонуклеаза сиңирүү, Тез клондоштуруу.
Эскертүүлөр
1. Ферменттин көлөмү реакция көлөмүнүн ≤ 1/10 бөлүгү.
2. Глицеролдун концентрациясы 5% ашык болгондо жылдыз активдүүлүгү пайда болушу мүмкүн.
3. Субстрат сунушталган катыштан төмөн болгондо бөлүнүү активдүүлүгү пайда болушу мүмкүн.
