CHO HCP ELISA комплекти
Бул анализде бир кадамдык иммуносорбенттин ELISA ыкмасы колдонулат.CHOK1 HCP камтыган үлгүлөр бир эле учурда HRP менен белгиленген теке анти-CHOK1 антитело жана ELISA пластинкасына капталган анти-CHOK1 антитело менен реакция кылып, акыры катуу фазалуу антитело-HCP менен белгиленген антителолордун сэндвич комплексин түзүшөт.Байланбаган антиген-антителону ELISA пластинасын жууп алып салууга болот.TMB субстраты жетиштүү реакция үчүн скважинага кошулат.Стоп эритмеси кошулгандан кийин түстүн өнүгүүсү токтотулат жана 450/650нм реакция эритмесинин OD же абсорбенция мааниси микропластинаны окугуч менен окулат.OD мааниси же абсорбенция мааниси эритмедеги HCP мазмунуна пропорционалдуу.Мындан, эритмедеги HCP концентрациясын стандарттык ийри сызык боюнча эсептөөгө болот.
Колдонмо
Бул комплект үлгүлөрдөгү CHOK1 кабыл алуучу клетка белок калдыктарынын мазмунун сандык аныктоо үчүн колдонулат.
Cкаршылаштары
| S/N | Компонент | Концентрация | Сактоо шарттары |
| 1 | CHOK1 HCP стандарты | 0,5 мг/мл | ≤–20℃ |
| 2 | Анти-CHO HCP-HRP | 0,5 мг/мл | ≤–20℃, жарыктан коргойт |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, жарыктан коргойт |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Чечүүнү токтотуу | NA | RT |
| 6 | Микропластинкаларды бекиткичтер | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Жогорку адсорбциялык алдын ала каптоочу плиталар | NA | 2-8℃ |
Керектүү жабдуулар
| Сарпталуучу материалдар / Жабдуулар | Өндүрүш | Каталог |
| Микропластинаны окугуч | Молекулярдык түзмөктөр | Spectra Max M5, M5e же эквиваленти |
| Термомиксер | Эпендорф | Eppendorf/5355, же эквиваленттүү |
| Vortex аралаштыргыч | IKA | MS3 Digital, же эквиваленттүү |
Сактоо жана туруктуулук
1.-25~-15°Ста ташуу.
2.Сактоо шарттары 1-таблицада көрсөтүлгөндөй;1-2 компоненттери ≤–20°C сакталат, 5-6 RT сакталат,3、4、7、8 2-8℃ температурада сакталат;жарактуу мөөнөтү 12 ай.
Продукт параметрлери
1.Сезгичтик: 1нг/мл
2.Аныктоо диапазону: 3- 100нг/мл
3.Тактык: Intra-assay CV≤ 10%, аралык CV≤ 15%
4.HCP камтуусу: >80%
5.Өзгөчөлүк: Бул комплект универсалдуу, анткени ал тазалоо процессинен көз карандысыз CHOK1 HCP менен реакцияга кирет.
Реагент даярдоо
1.PBST 0,05%
15 мл 20×PBST 0,05%, ДДН менен суюлтулган алыңыз2О, жана 300 мл чейин түзөт.
2.1,0% BSA
Бөтөлкөдөн 1 г БСА алып, 100 мл PBST 0,05% суюлтуңуз, толук эригенче жакшылап аралаштырып, 2-8°С температурада сактаңыз.Даярдалган суюлтуу буфери 7 күн бою жарактуу.Керектүүлүгүнө жараша даярдоо сунушталат.
3.Детектордук эритме 2мкг/мл
48μL 0,5 мг/мл Анти-CHO HCP-HRP алып, 2мкг/мл аныктоочу эритменин акыркы концентрациясын алуу үчүн 1% BSA 11,952μL менен суюлтуңуз.
4.QC жана CHOK1 HCP стандарттарын даярдоо
| Түтүк Жок. | Original | Концентрация | Көлөм | 1% BSA | жалпы көлөмү | Финал |
| A | Стандарт | 0,5 мг/мл | 10 | 490 | 500 | 10 000 |
| B | A | 10 000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Таблица: КС жана стандарттарды даярдоо
Талдоо процедурасы
1.Реагенттерди жогоруда "Реактив даярдоо" бөлүмүндө көрсөтүлгөндөй даярдаңыз.
2.Ар бир скважинага 50мкл стандарттарды, үлгүлөрдү жана ККны (3-таблицаны караңыз) алыңыз, андан кийин 100μL Detection эритмесин (2мкг/мл) кошуңуз;Пластинканы герметика менен жаап, ELISA табакчасын термомиксерге салыңыз.500 rpm, 25±3℃ 2 саат инкубациялоо.
3.Раковинадагы микропластинаны төңкөрүп, каптоочу эритмени ыргытыңыз.ELISA табакчасын жууп, эритмени ыргытуу үчүн ар бир скважинага 300μL PBST 0,05% пипетка салып, жуунууну 3 жолу кайталаңыз.Табакты таза кагаз сүлгүгө которуп, кургатып салыңыз.
4.Ар бир кудукка 100мклTMB субстратын кошуп (1-таблицаны караңыз), ELISA пластинасын жаап, караңгыда 25±3℃ температурада 15 мүнөткө инкубациялаңыз.
5.Ар бир скважинага 100 мкл токтотуучу эритмени пипетка менен тамызыңыз.
6.Микропластинаны окугуч менен 450/650нм толкун узундугунда абсорбенцияны өлчөңүз.
7.SoftMax же ага окшош программалык камсыздоо менен маалыматтарды талдоо.Төрт параметрлүү логистикалык регрессиялык моделди колдонуу менен стандарттык ийри сызык.
Стандарттык ийри сызык мисалы
ЭСКЕРТҮҮ: Эгерде үлгүдөгү HCP концентрациясы стандарттык ийри сызыктын жогорку чегинен ашып кетсе, аны сыноодон мурун суюлтуу буфери менен туура суюлтуу керек.
ЭСКЕРТҮҮЛӨР
Токтотуу эритмеси 2M күкүрт кислотасы, чачырабаш үчүн этияттык менен кармаңыз!
