DNase I

DNase I (Дезоксирибонуклеаза I) бир же эки тилкелүү ДНКны сиңире алган эндодеоксирибонуклеаза.Ал 5′-терминалында фосфат топтору бар монодезоксинуклеотиддерди же бир же эки спиралдуу олигодеоксинуклеотиддерди жана 3′-терминалында гидроксилдерди пайда кылуу үчүн фосфодиэстер байланыштарын тааныйт жана ажыратат.DNase I активдүүлүгү Ca2+ көз каранды жана Mn2+ жана Zn2+ сыяктуу эки валенттүү металл иондору менен активдештирилиши мүмкүн.5мМ Са2+ ферментти гидролизден коргойт.Mg2+ болгон учурда фермент ДНКнын каалаган тилкесиндеги каалаган жерди кокустан таанып, ажырата алган.Mn2+ катышуусунда ДНКнын кош тилкелери бир эле учурда таанылып, дээрлик бир жерде ажырап, жалпак учу ДНК фрагменттерин же 1-2 нуклеотиддери чыгып турган жабышчаак учу ДНК фрагменттерин пайда кылышы мүмкүн.

Продукт касиети

Bovine Pancreas DNase I ачыткы экспрессия системасында туюнду жана тазаланды.

Cкаршылаштары

Ташуу жана сактоо

1. Сактоо туруктуулугу: – 15℃~-25℃ сактоо үчүн;

2.Transport туруктуулугу: Муз пакеттеринин астында транспорт;

3. Берилген: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl₂, 50% глицерин, рН 7,6 25℃.

Бирдиктин аныктамасы

Бир бирдик 1 мкг pBR322 ДНКсын 37°Cде 10 мүнөттө толугу менен буза турган ферменттин көлөмү катары аныкталат.

Сапатты көзөмөлдөө

RNase:5U DNase I 1,6 мкг MS2 РНКсы менен 37 ℃ температурада 4 саат бою агароз гел электрофорези менен аныкталгандай деградацияны бербейт.

Бактериялык Эндотоксин:LAL-тест, Кытай фармакопеясынын IV 2020 басылышына ылайык, гелдин чегин текшерүү ыкмасы, жалпы эреже (1143).Бактериялык эндотоксин мазмуну ≤10 ЕС/мг болушу керек.

Колдонуу боюнча нускамалар

1. Реакция эритмени RNase жок түтүктө төмөндө көрсөтүлгөн пропорцияларга ылайык даярдаңыз:

2,37 ℃ 15 мүнөткө;

3.Реакцияны токтотуу үчүн токтотуу буферин кошуп, DNase I инактивациялоо үчүн 65℃ 10 мүнөт ысытыңыз. Үлгү кийинки транскрипция эксперименти үчүн түздөн-түз колдонулушу мүмкүн.

Эскертүүлөр

1.РНКнын бир мкг үчүн 1U DNase I колдонуңуз, же 1мкг РНКдан азыраак үчүн 1U DNase I колдонуңуз.

2.EDTA 5 мМ акыркы концентрациясына кошулушу керек, РНКны ферментти активдештирүү учурунда бузулуудан коргоо үчүн.