Ультра нуклеаза
UltraNuclease - бул Serratia marcescens тукумунан алынган генетикалык инженердик-дендонуклаз, ал ДНКны же РНКны, эки же бир саптуу, сызыктуу же тегерек формада деградациялоого жөндөмдүү, нуклеиндик кислоталарды 5'-монофосфаттык олигонуклеотиддердин узундугу менен толук деградациялоого жөндөмдүү. .Гендик инженерия модификациясынан кийин, продукт ачытылган, экспрессияланган жана ичеги таякчасында (E. coli) тазаланган, бул клетка супернатантынын жана клетка лизатынын илимий изилдөөлөрүнүн илешкектүүлүгүн азайтат, ошондой эле протеиндин тазалоонун натыйжалуулугун жана функционалдык изилдөөсүн жакшыртат.Ал ошондой эле ген терапиясында, вирустарды тазалоодо, вакциналарды өндүрүүдө, протеиндик жана полисахариддик фармацевтикалык өнөр жайда нуклеин кислотасынын калдыктарын алып салуучу реагент катары колдонулушу мүмкүн.
Продукт өзгөчөлүктөрү
| CAS № | 9025-65-4 |
| EC № | |
| Молекулярдык Салмак | 30кДа |
| Изоэлектрдик чекит | 6.85 |
| Протеин тазалыгы | ≥99%（ SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Өзгөчө активдүүлүк | ≥1.1×106U/мг |
| Оптималдуу Температура | 37°C |
| Оптималдуу рН | 8.0 |
| ProteaseActivity | терс |
| Биологиялык жүк | ＜10CFU/100,000U |
| Калдык Хост-клетка протеин | ≤10ppm |
| Heavy Metal | ≤10ppm |
| Бактериялык эндотоксин | ＜0,25EU/1000U |
| Сактоочу буфер | 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2 ， 20mM NaCl, 50% глицерин |
Сактоо шарттары
≤0°C ташуу;-25~-15°C Сактоо, 2 жыл жарактуу (тоңдуруу-эритүүдөн сактануу).
Бирдиктин аныктамасы
37 °C, pH 8.0, 30мин ичинде △A260 сиңирүү маанисин 1.0 га өзгөртүү үчүн колдонулган ферменттин суммасы, олигонуклеотиддерге кесүү аркылуу сиңирилген 37μg лосось сперматозоидунун ДНКсына барабар, активдүү бирдик (U) катары аныкталган.
Сапатты контролдоо
Калдык Хост-клетка протеин: ELISA комплекти
•Протеаза калдыктары: 250KU/mL UltraNuclease субстрат менен 60мин реакцияга кирди, эч кандай активдүүлүк байкалган жок.
•Бактериялык эндотоксин: LAL-Тест, Кытай Эл Республикасынын Фармакопеясы 4-том (2020-ж. Чыг.) гелдин чегин сыноо ыкмасы.Жалпы эрежелер (1143).
•Биологиялык жүк: Кытай Эл Республикасынын Фармакопеясы 4-том (2020-ж. Чыг.) — Жалпы
Стерилдүүлүк сыноо эрежелери (1101), КЭР Улуттук стандарты, GB 4789.2-2016.
•Оор металл:ICP-AES, HJ776-2015.
Операция
SDS концентрациясы 0,1% же EDTA жогору болгондо UltraNuclease активдүүлүгү олуттуу түрдө тоскоол болгон
концентрациясы 1 мммден ашкан. Surfactant Triton X- 100, Tween 20 жана Tween 80 нуклеазага эч кандай таасир тийгизген эмес.
касиеттери концентрациясы 1,5% төмөн болгондо.
| Операция | Оптималдуу операция | Жарактуу операция |
| Температура | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2мМ | 1- 15мМ |
| DTT | 0- 100мМ | >100мм |
| 2-Меркаптоэтанол | 0- 100мМ | >100мм |
| Моноваленттүү металл иону (Na+, K+ ж.б.) | 0-20мМ | 0-200мМ |
| PO43- | 0- 10мМ | 0- 100мМ |
Колдонуу жана дозалоо
• Вакцина продуктуларынан экзогендик нуклеин кислотасын алып салыңыз, калдык нуклеин кислотасынын уулуулугунун коркунучун азайтыңыз жана продуктунун коопсуздугун жакшыртыңыз.
• Нуклеин кислотасы менен шартталган тоют суюктугунун илешкектүүлүгүн азайтуу, иштетүү убактысын кыскартуу жана белоктун түшүмдүүлүгүн жогорулатуу.
• Оролгон нуклеин кислотасын алып салыңыз (вирус, инклюзия денеси ж.б.)
бөлүкчөлөрдү чыгарууга жана тазалоого.
| Эксперименттик түрү | Протеин өндүрүү | Вирус, Вакцина | Клеткалык дарылар |
| Клеткалардын саны | 1 г клетка нымдуу салмагы (10 мл буфер менен кайра суспензияланган) | 1 л ачытуу суюк супернатант | 1л маданият |
| Минималдуу доза | 250U | 100U | 100U |
| Сунушталган доза | 2500U | 25000U | 5000U |
• Нуклеаздык дарылоо колонна хроматографиясы, электрофорез жана блоттинг анализи үчүн үлгүнүн чечүүнү жана калыбына келтирүүнү жакшыртат.
• Ген терапиясында тазаланган адено-ассоциацияланган вирустарды алуу үчүн нуклеин кислотасы алынып салынат.
