Warm Start Bst 2.0 ДНК Полимераза (Глицерол жок)

Bst ДНК полимераза V2 Bacillus stearothermophilus ДНК Полимераза Iден алынган, ал 5′→3′ ДНК полимераза активдүүлүгүнө жана күчтүү чынжыр алмаштыруу активдүүлүгүнө ээ, бирок 5′→3′ экзонуклеаза активдүүлүгү жок.Bst DNA Polymerase V2 жипти алмаштыруу, изотермикалык күчөтүү LAMP (Loop mediated isothermic amplification) жана тез секвенирлөө үчүн идеалдуу ылайыктуу.Bst ДНК полимераза V2 - бул Bst ДНК полимераза V2 (HC5005A) негизиндеги ысык баштоо версиясы, реверсивдүү модификациялоо технологиясы менен алынган, ал бөлмө температурасында ДНК-полимеразанын активдүүлүгүн токтото алат, ошондуктан реакция системасы бөлмө температурасында иштетилип, түзүлүшү мүмкүн эмес. -спецификалык күчөтүү жана реакциянын эффективдүүлүгүн жогорулатуу жана бул версияны лиофилизациялоого болот.Мындан тышкары, анын активдүүлүгү жогорку температурада чыгарылат, ошондуктан өзүнчө активдештирүү кадамынын кереги жок.

Компоненттер

Bst ДНК полимераза V2 (глицеринсиз)(8U/мкл)

Тиркемелер

1.LAMP изотермикалык күчөтүү

2.ДНК тилкесинин бир орун алмаштыруу реакциясы

3.Жогорку GC ген секвенциясы

4.Нанограмма деңгээлиндеги ДНК секвенциясы.

Сактоо абалы

0 ° C астында ташуу жана -25 ° C ~ -15 ° C сакталат.

Бирдиктин аныктамасы

Бир бирдик 65°С температурада 30 мүнөттө кислотада эрибеген материалга 25 нмоль dNTP киргизген ферменттин саны катары аныкталат.

Сапатты көзөмөлдөө

1.Белоктун тазалыгынын анализи (SDS-PAGE):Bst ДНК полимераза V2 тазалыгы ≥99% Coomassie Blue аныктоо аркылуу SDS-PAGE анализи менен аныкталат.

2.EнонуклеазаАктивдүүлүк:Минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 камтыган 50 мкл реакцияны 1 мкг λДНК менен 37 ℃ температурада 16 саатка инкубациялоо аныкталгандай деградацияга алып келбейт.

3.Экзонуклеазанын активдүүлүгү:Минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 камтыган 50 мкл реакцияны 1 мкг λ -Hind Ⅲ дайджест ДНКсы менен 37 ℃ температурада 16 саатка инкубациялоо аныкталгандай эч кандай деградацияга алып келбейт.

4.Nickase Activity:Минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 камтыган 50 мкл реакцияны 1 мкг pBR322 ДНКсы менен 37°Cде 16 саатка инкубациялоо аныкталгандай деградацияга алып келбейт.

5.RNase Activity:Минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 камтыган 50 мкл реакцияны 1,6 мкг MS2 РНК менен 37°C температурада 16 саатка инкубациялоо аныкталгандай деградацияга алып келбейт.

6.E. coliДНК:120 U Bst ДНК полимераза V2 E. coli геномдук ДНКсынын бар экендиги үчүн E. coli 16S рРНК локусуна мүнөздүү праймерлер менен TaqMan qPCR аркылуу текшерилет.E. coli геномдук ДНК булганышы ≤1 копия болуп саналат.

LAMP реакциясы

Эскертүүлөр:

1) а.SYTOTM 16 Green (25×): эксперименталдык муктаждыктарга ылайык, башка боёкторду алмаштыруучу катары колдонсо болот;

2) б.Праймер аралашмасы: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB жана башка көлөмдөрдү аралаштыруу менен алынган.

Реакция жана шарт

1 × HC Bst V2 Buffer, инкубациялоо температурасы 60°C жана 65°C ортосунда.

Жылуулук инактивациялоо

 80°C, 20мин