Үлгү чыгаруучу реагент
Үлгү чыгаруу реагенти молекулярдык POCT диагностикалык сценарийлери үчүн.Түздөн-түз күчөтүү LAMP жана түздөн-түз күчөтүү ПТР эки системасы үчүн нуклеин кислотасын экстракциялоонун кереги жок.Үлгүнүн чийки лизатын түздөн-түз күчөтүп, максаттуу генди так аныктоого болот, үлгүнү аныктоо убактысын дагы кыскартса болот, бул молекулярдык POCTтин колдонуу талаптарына толук дал келет.Бул мурун тампондору, тамак тампондору жана башка үлгү түрлөрү үчүн ылайыктуу.Иштелип чыккан үлгүлөр реалдуу убакыт режиминде флуоресценттик сандык ПТР же LAMP аныктоо үчүн түздөн-түз колдонулушу мүмкүн жана кадимки экстракция ыкмалары сыяктуу эле натыйжаларга нуклеин кислотасын алуу боюнча татаал операцияларсыз жетишүүгө болот.
Сактоо шарттары
Ташуу жана бөлмө температурасында сактоо.
Сапатты контролдоо
Функционалдык аныктоо – сандык qPCR: 800μl үлгү чыгаруу реагент системасы күчөтүлдү
1000 нуска менен Novel Pseudovirus, бир мурундун тампонунун үлгүсү, натыйжада окшош күчөгөн ийри сызыктар жанаΔCt маанилери ± 0,5 Ct ичинде.
Эксперименттик процедураres
1. 800 мкл Үлгү чыгаруучу реагент алып, лизис эритмени 1,5 мл үлгү алуу түтүгүнө жайыңыз.
2. Тампон менен мурундун тампонун же тамак тампонун алыңыз; Мурун тампонунун үлгүсүн алуу процедурасы: стерилдүү тампонду алып, аны мурун тешиктерине салыңыз, акырындык менен 1,5 см тереңдикке чейин илгерилеңиз, мурундун былжырлуу челине 15 секунддан ашык убакытка акырын 4 жолу айлантыңыз. , андан кийин ошол эле тампон менен башка мурун көңдөйүнө ошол эле операцияны кайталаъыз. Тампондун үлгүсүн алуу жол-жобосу: стерилдүү тампонду алып, акырындык менен фарингалдык бадамча бездерин жана арткы фарингалдык дубалды 3 жолу тез сүртүңүз.
3.Тампонду дароо үлгү алуу түтүгүнө салыңыз.Тампондун башын айландыруу жана сактоо эритмесинде 30 секунддан кем эмес убакытка аралаштыруу керек, бул үлгү үлгү алуу түтүкчөсүндө толук элюцияланганын камсыз кылуу үчүн.
4. Бөлмө температурасында (20~25℃) 1 мүнөткө инкубациялоо, лизис буферин даярдоо аяктады.
5. 25μl системасы RT-PCR жана RT-LAMP экөө тең аныктоо эксперименттери үчүн шаблондун 10μl суммасына шайкеш келген.
Эскертүүлөр
1. Бир тампонго туура келген үлгүдөгү түздөн-түз лизаттын минималдуу көлөмү 400μlге чейин жөндөлүшү мүмкүн, ал тестирлөө муктаждыктарына ылайык жөнгө салынышы мүмкүн.
2. Үлгү үлгүнү чыгаруучу реагент менен иштетилгенден кийин, сыноонун кийинки фазасын мүмкүн болушунча эртерээк өткөрүү сунушталат, күтүү аралыгы 1 сааттан азыраак.
3. Үлгү лизатынын рН кычкыл жана аныктоо системасы белгилүү бир буферге ээ болушу керек.Бул рН буфери менен көпчүлүк ПТР, RT-PCR жана LAMP флуоресценциясын аныктоо үчүн ылайыктуу, бирок буферсиз LAMP колориметриялык аныктоо үчүн ылайыктуу эмес.
