Bst 2.0 ДНК Полимераза (Глицерол жок, жогорку тыгыздык)
Bst ДНК полимераза V2 Bacillus stearothermophilus ДНК Полимераза Iден алынган, ал 5′→3′ ДНК полимераза активдүүлүгүнө жана күчтүү чынжыр алмаштыруу активдүүлүгүнө ээ, бирок 5′→3′ экзонуклеаза активдүүлүгү жок.Bst DNA Polymerase V2 жипти алмаштыруу, изотермикалык күчөтүү LAMP (Loop mediated isothermic amplification) жана тез секвенирлөө үчүн идеалдуу ылайыктуу.Бул Bst ДНК полимераза V2 бөлмө температурасында ДНК полимераза активдүүлүгүн бөгөт коюуга жөндөмдүү, ошондуктан аны иштетүүгө жана реакция системасын бөлмө температурасында түзүүгө, спецификалык эмес күчөтүүнү болтурбоого жана реакциянын эффективдүүлүгүн жогорулатууга болот. лиофилизацияланат.Мындан тышкары, ал жогорку температурада өзүнүн активдүүлүгүн бошотуп, өзүнчө активдештирүүнүн зарылдыгын жок кылууга жөндөмдүү.
Компоненттер
Компонент | HC5007A-01 | HC5007A-02 | HC5007A-03 |
Bst ДНК полимераза V2 (глицеринсиз) (32U/мкл) | 0,05 мл | 0,25 мл | 2,5 мл |
10×HC Bst V2 буфери | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 3×10 мл |
MgSO4 (100мМ) | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 2×10 мл |
Тиркемелер
1.LAMP изотермикалык күчөтүү
2.ДНК тилкесинин бир орун алмаштыруу реакциясы
3.Жогорку GC ген секвенциясы
4.Нанограмма деңгээлиндеги ДНК секвенциясы.
Сактоо абалы
0 ° C астында ташуу жана -25 ° C ~ -15 ° C сакталат.
Бирдиктин аныктамасы
Бир бирдик 65°С температурада 30 мүнөттө кислотада эрибеген материалга 25 нмоль dNTP киргизген ферменттин саны катары аныкталат.
LAMP реакциясы
Компоненттер | 25 мклСистема |
10×HC Bst V2 буфери | 2,5 мкл |
MgSO4 (100мМ) | 1,5 мкл |
dNTPs (ар бири 10мМ) | 3,5 мкл |
SYTO™ 16 Жашыл (25×)a | 1,0 мкл |
Праймер аралашмасыb | 6 мкл |
Bst ДНК Полимераз V2 (Глицеролсуз) (32 U/uL) | 0,25 мкл |
Шаблон | × мкл |
ddH₂O | 25 мкл чейин |
Эскертүүлөр:
1) а.SYTOTM 16 Green (25×): эксперименталдык муктаждыктарга ылайык, башка боёкторду алмаштыруучу катары колдонсо болот;
2) б.Primer аралашмасы: 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB жана башка көлөмдөрдү аралаштыруу менен алынган.
Реакция жана шарт
1 × HC Bst V2 Buffer, инкубациялоо температурасы 60°C жана 65°C ортосунда.
Жылуулук инактивациялоо
80°C, 20мин.