Multiplex qPCR Probe Premix
Cat №: HCB5051A
TaqMan мультиплекси qPCR Master Mix (Боёктун негизинде) – бул көк түстөгү жогорку сезгичтиги жана өзгөчөлүгү менен мүнөздөлгөн, 2 × реалдуу убакыттагы сандык ПТР күчөтүү үчүн алдын ала чечим.Бул продукт 2× Микс алдын ала аралаштырылган реагент болуп саналат, ал бир реакциялык скважинада төрт флуоресценттик сандык ПТР реакциясын жүргүзүүгө мүмкүндүк берет.Бул продукт Taq энзимин ысык баштоо үчүн генетикалык жактан өзгөртүлгөн антитело ыкмасын камтыйт, бул күчөтүү сезгичтигин жана өзгөчөлүгүн бир топ жакшыртат.Ошол эле учурда, бул продукт көп реакциялуу буферди терең оптималдаштырды, ал реакциянын күчөтүү эффективдүүлүгүн жакшыртат жана аз концентрациялуу шаблондорду эффективдүү күчөтүүгө көмөктөшөт.Бул продукт генотип жана мультиплекс сандык талдоо үчүн колдонулушу мүмкүн.
Спецификация
| Hot Start | Камтылган ысык баштоо |
| аныктоо ыкмасы | Пример-зондду аныктоо |
| ПЦР ыкмасы | qPCR |
| Полимераз | Так ДНК полимераза |
| Үлгү түрү | ДНК |
Сактоо шарттары
продукт кургак муз менен жөнөтүлөт жана 2 жыл бою -25 ~ -15 ℃ сактоого болот.
Instructions
1. РеакцияСистема
| Компоненттер | Көлөмү (мкл) | Акыркы концентрация |
| 2× TaqMan мультиплекс qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Праймер аралашмасы (10 мкмоль/л) a | × | 0,1 - 0,5 мкмоль/л |
| Зонд аралашмасы (10 мкмоль/л)b | × | 50 - 250 нмоль/л |
| Rox шилтеме боёгу | 0.5 | 1× |
| Үлгү ДНК/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | 25ке чейин | - |
Эскертүүлөр:Ашыкча көбүкчөлөрдүн пайда болушуна жол бербөө үчүн колдонуудан мурун жакшылап аралаштырыңыз.
а.Праймердин концентрациясы: Primer Mix бир нече жуп праймерди камтыйт, адатта ар бир праймер акыркы концентрацияда 0,2 мкмоль/л жана ошондой эле тийиштүү түрдө 0,1 жана 0,5 мкмоль/л ортосунда жөнгө салынышы мүмкүн.
б.Зонддун концентрациясы: Зонд аралашмасы ар кандай флуоресценттик сигналдары бар бир нече зонддорду камтыйт жана ар бир зонддун концентрациясын конкреттүү кырдаалга ылайык 50 жана 250 нмоль/л ортосунда жөнгө салууга болот.
1.Rox боёк шилтемеси: Бул скважиналардын ортосунда түзүлгөн флуоресценттик сигналдын катасын оңдоо үчүн Applied Biosystems сыяктуу реалдуу убакыттагы ПТР күчөтүү аспабында колдонулат;бул продукт Rox боёгу шилтемесин камтыбайт.Керек болсо, Cas # 10200 сунушталат.
2.Шаблонду суюлтуу: qPCR өтө сезгич жана колдонуу үчүн шаблонду суюлтуу сунушталат.Эгерде калып cDNA запастык эритмеси болсо, шаблондун көлөмү жалпы көлөмдүн 1/10 бөлүгүнөн ашпашы керек.
3.Реакция системасы: 25μL, 30μL же 50 μL максаттуу генди күчөтүүнүн натыйжалуулугун жана кайталанышын камсыз кылуу үчүн сунушталат.
4.Системаны даярдоо: Сураныч, супер таза отургучта даярданыңыз жана нуклеаза калдыктары жок учтарды жана реакция түтүктөрүн колдонуңуз;чыпкалуу картридждер менен учтарды колдонуу сунушталат.Кайчылаш булгануудан жана аэрозолдук булгануудан сактаныңыз.
2.Реакция программасы
| Цикл кадамы | Темп. | Убакыт | Циклдер |
| Баштапкы денатурация | 95 ℃ | 5мин | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 15сек | 45 |
| Күйүү/узартуу | 60 ℃ | 30сек |
Эскертүүлөр:
1.Күйүү/узартуу: Температураны жана убакытты ылайыктуу иштелип чыккан праймердин Tm маанисине ылайык жөнгө салууга болот.
2.Флуоресценция сигналын алуу: Ар кандай qPCR аныктоо аспаптары үчүн талап кылынган флуоресценция сигналын алуу убактысы ар кандай, минималдуу убакыт чегине ылайык орнотуңуз.Бир нече жалпы инструменттердин убактысы төмөнкүдөй белгиленет:
20 сек: Колдонмо Биосистемалары 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 сек: Колдонмо Биосистемасы 7300
32 сек: Колдонмо Биосистемасы 7500
Эскертүүлөр
Сураныч, ден соолугуңузду жана коопсуздугуңузду камсыз кылуу үчүн керектүү ЖККны, лабораториялык халатты жана кол каптарды кийиңиз!
