Universal SYBR GREEN qPCR Premix (көк)
Cat №: HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (Боёктун негизинде) бул жогорку сезгичтиги жана өзгөчөлүгү менен мүнөздөлгөн 2 × реалдуу убакытта сандык ПТР күчөтүү үчүн алдын ала чечим, көк түстө жана үлгүлөрдү кошууга байкоо жүргүзүү эффектиси бар.Так ДНК полимеразасынын негизги компоненти антителолордун ысык башталышын колдонот, бул үлгү даярдоо учурунда праймерди күйдүрүүдөн улам спецификалык эмес күчөтүүнү эффективдүү токтотот.Ошол эле учурда формула ПТР реакциясынын күчөтүү эффективдүүлүгүн жогорулатуу жана ар кандай GC мазмуну (30 ~ 70%) менен гендердин күчөшүн теңдөө үчүн көмөкчү факторлорду кошот, ошондуктан сандык ПТР кеңири санда жакшы сызыктуу байланышты ала алат. аймак.Бул продукт көпчүлүк qPCR инструменттерине тиешелүү болгон атайын ROX Passive Reference Dye камтылган.Ар кандай аспаптарда ROX концентрациясын тууралоонун кереги жок.Реакция системасын күчөтүү үчүн даярдоо үчүн праймерлерди жана шаблондорду кошуу гана керек.
Компоненттер
Universal Blue qPCR Master Mix
Сактоо шарттары
Продукт муз пакеттери менен жөнөтүлөт жана -25℃~-15℃ температурада 18 айга сакталат.Реакция системасын сактоодо же даярдоодо күчтүү жарык нурлануусунан качуу зарыл.
Спецификация
| Концентрация | 2× |
| аныктоо ыкмасы | SYBR |
| ПЦР ыкмасы | qPCR |
| Полимераз | Так ДНК полимераза |
| Үлгү түрү | ДНК |
| Колдонмо жабдуулар | Көпчүлүк qPCR аспаптары |
| Продукт түрү | реалдуу убакыт флуоресценттик сандык ПТР үчүн SYBR премикси |
| (өтүнмө) кайрылуу | Ген экспрессиясы |
Instructions
1. Реакция системасы
| Компоненттер | Көлөмү(μL） | Көлөмү(μL） | Акыркы концентрация |
| Universal SYBR GREEN qPCR Premix | 25 | 10 | 1× |
| Алдыга праймер (10мкмоль/л) | 1 | 0.4 | 0,2мкмоль/л |
| Тескери праймер (10мкмоль/л) | 1 | 0.4 | 0,2мкмоль/л |
| ДНК | X | X | |
| ddH2O | 50гө чейин | 20га чейин | - |
[Эскертүү]: Колдонуудан мурун катуу чайкоодон ашыкча көбүктөрдүн пайда болушуна жол бербөө үчүн жакшылап аралаштырыңыз.
а) Праймердин концентрациясы: Праймердин акыркы концентрациясы 0,2мкмоль/л, ошондой эле тийиштүү түрдө 0,1 жана 1,0мкмоль/л ортосунда жөнгө салынышы мүмкүн.
б) Калыптын концентрациясы: Эгерде калып суюлтулган cDNA запастык эритмеси болсо, анда колдонулган көлөм qPCR реакциясынын жалпы көлөмүнүн 1/10унан ашпашы керек.
в) Калыптын суюлтуусу: cDNA запастык эритмени 5-10 эсе суюлтуу сунушталат.Кошулган шаблондун оптималдуу көлөмү күчөтүү жолу менен алынган Ct мааниси 20-30 цикл болгондо жакшы болот.
г) Реакция системасы: Максаттуу генди күчөтүүнүн натыйжалуулугун жана кайталанышын камсыз кылуу үчүн 20μL же 50μL колдонуу сунушталат.
e) Системаны даярдоо: Өтө таза отургучта даярданыңыз жана нуклеаза калдыктары жок учтарды жана реакция түтүктөрүн колдонуңуз;чыпкалуу картридждер менен учтарды колдонуу сунушталат.Кайчылаш булгануудан жана аэрозолдук булгануудан сактаныңыз.
2.Реакция программасы
Стандарттык программа
| Цикл кадамы | Темп. | Убакыт | Циклдер |
| Баштапкы денатурация | 95℃ | 2 мүн | 1 |
| Денатурация | 95℃ | 10 сек | 40 |
| Күйүү/узартуу | 60℃ | 30 сек★ | |
| Эрүү ийри баскычы | Инструменттин демейки параметрлери | 1 | |
Ыкчам программа
| Цикл кадамы | Темп. | Убакыт | Циклдер |
| Баштапкы денатурация | 95℃ | 30 сек | 1 |
| Денатурация | 95℃ | 3 сек | 40 |
| Күйүү/узартуу | 60℃ | 20 сек★ | |
| Эрүү ийри баскычы | Инструменттин демейки параметрлери | 1 | |
[Эскертүү]: Ыкчам программа гендердин басымдуу бөлүгүнө ылайыктуу, ал эми стандарттуу программаларды жеке татаал экинчи структуралык гендер үчүн аракет кылса болот.
а) Күйүү температурасы жана убактысы: Праймердин жана максаттуу гендин узундугуна жараша тууралаңыз.
б) Флуоресценция сигналын алуу (★): Сураныч, аспапты колдонуу нускамасындагы талаптарга ылайык эксперименталдык процедураны орнотуңуз.
в) Эрүү ийри сызыгы: Аспаптын демейки программасын кадимкидей колдонсо болот.
3. Натыйжаларды талдоо
Сандык эксперименттер үчүн эң аз дегенде үч биологиялык кайталоо талап кылынган.Реакциядан кийин күчөтүү жана эрүү ийри сызыгын ырастоо керек.
3.1 Күчөтүү ийри сызыгы:
Стандарттык күчөтүү ийри сызыгы S формасында.Сандык талдоо Ct мааниси 20дан 30га чейин түшкөндө эң так болот. Эгерде Ct мааниси 10дон аз болсо, шаблонду суюлтуу жана сыноону кайра жүргүзүү керек.Ct мааниси 30-35 ортосунда болгондо, күчөтүү эффективдүүлүгүн жогорулатуу жана натыйжаны анализдөөнүн тактыгын камсыз кылуу үчүн калыптын концентрациясын же реакция системасынын көлөмүн жогорулатуу керек.Ct мааниси 35тен жогору болгондо, тесттин натыйжалары гендин экспрессиясын сандык жактан талдай албайт, бирок сапаттык анализ үчүн колдонулушу мүмкүн.
3.2 Эрүү ийри сызыгы:
Эрүү ийри сызыгынын жалгыз чокусу реакциянын өзгөчөлүгү жакшы экендигин жана сандык талдоо жүргүзүүгө боло тургандыгын көрсөтөт;эгерде эрүү ийри эки же бир нече чокуларды көрсөтсө, сандык анализ жүргүзүү мүмкүн эмес.Эрүү ийри сызыгы кош чокуларды көрсөтөт жана максаттуу эмес чокусу праймер димерби же ДНК агароз гелинин электрофорези менен спецификалык эмес күчөтүү экендигин аныктоо керек.Эгерде бул праймер димери болсо, анда праймердин концентрациясын азайтуу же күчөтүү эффективдүүлүгү жогору болгон праймерлерди кайра долбоорлоо сунушталат.Эгер бул спецификалык эмес күчөтүү болсо, күйдүрүү температурасын жогорулатыңыз же праймерлерди өзгөчөлүк менен кайра конструкциялаңыз.
Эскертүүлөр
Сураныч, ден соолук жана коопсуздукту камсыз кылуу үчүн зарыл болгон ЖККны, лабораториялык халат жана кол каптарды кийиңиз!
Бул продукт изилдөө үчүн гана!
