Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Cat №: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) – шаблон катары РНКга негизделген мультиплекс сандык ПТР комплекти.Эксперименттин жүрүшүндө тескери транскрипция жана сандык ПТР бир эле түтүктө жүргүзүлдү, бул эксперименталдык операцияны жөнөкөйлөштүрдү жана булгануу коркунучун азайтты.Бул комплектте биринчи катардагы cDNA ысыкка чыдамдуу Кайтарма транскриптаза менен эффективдүү синтезделген жана HotStart Tag ДНК Полимеразасы менен сандык жактан күчөтүлгөн.Комплект негизинен оптималдаштырылган MP буферин, ферменттердин аралашмасын ж.б. камтыйт. Буфердик эритмеде Mg камтылган.2+жана dNTP.Мындан тышкары, спецификалык эмес ПТР күчөтүүсүнө эффективдүү тоскоол боло турган жана бир нече qPCR реакцияларынын күчөтүү эффективдүүлүгүн жогорулатуучу факторлор кошулат, алар күчөтүү эффективдүүлүгүн камсыздай алат жана бир нече күчөтүү реакциясына чейин жүргүзө алат.dUTP/UDG системасы аэрозоль менен булгануу коркунучун натыйжалуу алдын алуу үчүн кошулган.
Компоненттер
1. Буфер
2. Фермент аралашмасы
Спецификация
| Hot Start | Камтылган ысык баштоо |
| аныктоо ыкмасы | Пример-зондду аныктоо |
| ПЦР ыкмасы | Бир кадам RT-qPCR |
| Полимераз | Так ДНК полимераза |
| Үлгү түрү | ДНК |
Сактоо шарттары
продукт кургак муз менен жөнөтүлөт жана 1 жыл бою -25 ~ -15 ℃ сактоого болот.Ал тез-тезден качуу керектоңуу-эрүү.Өзүнчө сактоо сунушталат.
Instructions
1.Реакция Система
| Компоненттер | Көлөмү (мкл) | Акыркы концентрация |
| 2 × МП буфер | 12.5 | 1× |
| Enzyme Mix | 1 | - |
| Праймер/Зонд аралашмасы (2,5 мкм) | 3 | 0.3μM |
| Үлгү РНК | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | 25ке чейин | - |
Эскертүүлөр:
Колдонуудан мурун жакшылап аралаштырууну унутпаңыз, катуу титирөөдөн улам ашыкча көбүкчөлөрдөн алыс болуңуз.
а.Праймердин концентрациясы: Праймер аралашмасы, анын ичинде мультиплекстүү праймер, кырдаалга жараша оптималдуу праймер концентрациясы 0.l жана 1.0μM ортосунда болушу мүмкүн.
б.Зонд концентрациясы: Зонд аралашмасы, анын ичинде мультиплекстүү зонд этикеткасынын флуоресценттик тобу, кырдаалга жараша оптималдуу зонд концентрациясы 0,05 жана 0,5 мкм ортосунда болушу мүмкүн.
в.Шаблонду суюлтуу: qPCR өтө сезгич жана шаблонду суюлтуу сунушталат.Башкаруу Ct мааниси 20 жана 35 ортосунда ылайыктуу.
г.Системаны даярдоо: Сураныч, нуклеаза калдыктары жок ультра таза жумушчу үстөлгө, пипетка жана реакция түтүгүнө даярдаңыз;мылтыктын башын чыпкалоочу элемент менен колдонуу сунушталат.Кайчылаш булгануудан жана аэрозолдук булгануудан сактаныңыз.
2. Оптимизацияланган велосипед тебүүПротокол
| Цикл кадам | Темп. | Убакыт | Циклдер |
| Тескери транскрипция | 50℃а | 20мин | 1 |
| Баштапкы денатурация | 95℃ | 5мин | 1 |
| Күчөтүү реакциясы | 95℃ | 15сек |
40-45 |
| 60℃ b | 30сек c |
Эскертүүлөр:
а.Тескери транскрипция: Температура 42°C же 50°C тандай алат.
б.Күчөтүү реакциясы: Температура долбоорлонгон праймерлердин Tm маанисине ылайык жөнгө салынат.
в.Флуоресценция сигналын алуу: Сураныч, эксперименталдык процедураны аспаптын колдонмосунун талаптарына ылайык орнотуңуз.
Эскертүүлөр
Ден соолугуңузду жана коопсуздугуңузду камсыз кылуу үчүн лабораториялык халат жана кол кап сыяктуу керектүү ЖККны кийиңиз.
