RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Бул продукт реакция буферин, RT-Enzymes Mix (Bst ДНК полимераза жана ысыкка туруктуу тескери транскриптаза), лиофилизацияланган коргоочуларды жана хромогендик боёк компоненттерин камтыйт.Колдонуу үчүн жөн гана Буферди колдонуңуз, реакция ферменти жана праймер аралашып калыпка кошулат;lyophilized коргоочу кошуу түз болушу мүмкүн.Ал лиофилизаторго туташтырылган жана лиофилизацияланган жана колдонулганда праймерлер жана шаблондор гана кошулган.Бул комплект күчөтүүнү тез, так визуалдык аныктоону камсыз кылат, ал терс реакция кызыл түстө, ал эми оң реакция сарыга өзгөрүшү менен көрсөтүлөт.
Компонент
| Компонент | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Цикл ортомчу күчөтүү буфери (боёк менен) | 0,96 мл | 4,80 мл×2 | 9,60 мл×10 |
| RT-Enzymes Mix | 270 мкл | 2,70 мл | 2,70 мл×10 |
| Лиофилизацияланган коргоочу | 0,96 мл×2 | 9,60 мл×2 | 9,60 мл×20 |
Тиркемелер
ДНК же РНК изотермикалык күчөтүү үчүн.
Сактоо шарттары
Кургак муз менен ташылат, -25 ~ -15 ℃ сакталат.Тез-тез тоңуп-эрүүдөн качыңыз, продукт 12 айга жарактуу.
Протокол
1.Бөлмө температурасында колдонула турган реакция буферин эритүү.Түтүктөрдү жакшылап аралаштыруу үчүн кыска убакытка айлантыңыз же бир нече жолу төңкөрүңүз, андан кийин суюктукту түтүктүн түбүнө чогултуу үчүн центрифугалаңыз.
2.Реакция системасын даярдоо.Бул реагент эки реакциялык системада, суюк реакция аралашмасы жана лиофилизацияланган система аралашмасы менен даярдалышы мүмкүн.
1) Суюк реакция аралашмасын даярдаңыз
| Компонент | Көлөм |
| Цикл ортомчу күчөтүү буфери (боёк менен) | 10 мкл |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 мкл |
| 10 × Primer Mixa | 5 мкл |
| Калыптар ДНК/РНК b | × мкл |
| Нуклеазсыз суу | 50 мкл чейин |
2) Лиофилизация системасынын аралашмасы
① Лиофилизацияланган аралашманы даярдаңыз
| Компонент | Көлөм |
| Цикл ортомчу күчөтүү буфери (боёк менен) | 10 мкл |
| Лиофилизацияланган коргоочу | 20 мкл |
| RT-Enzymes Mix | 2,8 мкл |
| Нуклеазсыз суу | 50 мкл чейин |
② Лиофилизация: Даярдалган Микс 50μL системасында лиофилизацияланган
③ Реакция аралашмасын даярдаңыз
| Компонент | Көлөм |
| Лиофилизацияланган аралашма | 1 даана |
| 10 × Primer Mixa | 5 мкл |
| Калыптар ДНК/РНК b | × мкл |
| Нуклеазсыз суу | 50 мкл чейин |
Эскертүүлөр:
1) а.10×Primer Mix : 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) б.DEPC (сууда эрүүчү) нуклеин кислотасы templ үчүн сунушталат.
1.65°C температурада 30-45 мүнөткө инкубациялаңыз, аны түстүн өзгөрүшүнө жараша ылайыктуу түрдө узартса болот.
2.Жөнөкөй көзгө караганда сары түс оң, кызыл түс терс болгон.
Эскертүүлөр
1.Туз буфердик түтүктүн түбүндө пайда болушу мүмкүн, бөлмө температурасында кылдат аралаштыруу үчүн түтүктөрдү кыска убакытка айлантып же бир нече жолу тескери салыңыз.
2.Реакциянын температурасы праймерлердин абалына жараша 62 ℃ жана 68 ℃ ортосунда оптималдаштырылышы мүмкүн.
3.Таңгакталган реагенттер абага көпкө чейин тийбеши керек.
4.Кызыл жана сары түстүн өзгөрүү реакциясы реакция системасынын рН өзгөрүшүнө жараша болот, ddH колдонуу сунушталган Tris нуклеин кислотасын сактоочу эритмени колдонбоңуз.2O сакталган нуклеин кислотасы;
5.Эксперимент стандартташтырылган болушу керек, анын ичинде реакциялык системаны даярдоо, лиофилизация жана үлгүлөрдү иштетүү жана үлгү кошуу процесси;
6.Булганууну болтурбоо үчүн реакция системасын ультра таза отургучта даярдоо сунушталат, башкаларында жалган позитивдүү тоскоолдуктарды болтурбоо үчүн бөлмөнүн түтүн капотуна шаблондорду кошуу.
