Урацил ДНК гликозилаза
Uracil-ДНК гликозилаза (UNG же UDG) - 25 кДа молекулалык салмагы менен E.coli рекомбинантты клону.Ал урацил камтыган бир жана эки тилкелүү ДНКдан эркин урацилдин чыгарылышын катализдейт жана РНКга каршы активдүү эмес жана ПТР күчөтүү продуктуларынын булганышын алдын алуу үчүн колдонулушу мүмкүн.Иштөө принциби эгер dUTP ПТР реакциясында dTTP менен алмаштырылса жана dU негиздерин камтыган ПТР күчөтүү продуктусу пайда болсо, фермент U негиздеринин гликозиддик байланышын бир жана эки тилкеде тандап үзө алаарына негизделген. ДНК жана ПЦР күчөтүү продуктуну начарлатат.
Сунушталган Колдонмо
Контаминациянын алдын алууну күчөтүү
Сактоо абалы
Узак мөөнөттүү сактоо үчүн -20°C, колдонуудан мурун жакшылап аралаштыруу керек, тез-тез тоңуп-эрүүдөн сактануу керек.
Сактоочу буфер
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
Бирдиктин аныктамасы
dU негиздерин камтыган 1μг бир тилкелүү ДНКны 1 саатта 37°Cде деградациялоо үчүн зарыл болгон ферменттин көлөмү 1 бирдикти түзөт.
Сапатты көзөмөлдөө
1.SDS-PAGE электрофоретикалык тазалыгы 98% дан жогору
2.Күчөтүү сезгичтиги, партиядан партияга башкаруу, туруктуулук
3.1U UNG 50 ℃ температурада 2 мүнөт иштетилгенден кийин, 103 нускадан төмөн U камтыган шаблон толугу менен бузулушу керек жана эч кандай күчөтүү продуктусун чыгарууга болбойт.
4.Экзогендик нуклеаздык активдүүлүк жок
Instructions
| Компоненттер | Көлөмү (мкл) | Акыркы концентрация |
| 10 × ПТР буфери (dNTP акысыз, Mg²+бекер) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 мкм |
| dUTP (dTTP алмаштыруу) | - | 200-600 мкм |
| 25 мМ MgCl2 | 2-8 мкл | 1-4 мм |
| 5 U/μL Так | 0,25 | 1.25 У |
| 5 U/μL UNG | 0,25 (0,1-0,5) | 0,25 U (0,1-0,5) |
| 25 × Primer Mixа | 2 | 1× |
| Шаблон | - | ＜1μg/реакция |
| ddH₂O | 50гө чейин | - |
Эскертүү: a: qPCR/qRT-PCR үчүн колдонулса, флуоресценттик зонд реакция системасына кошулушу керек.Адатта, 0,2 мкм акыркы праймер концентрациясы жакшы натыйжаларды бере алат;реакциянын натыйжалуулугу начар болгондо, праймердин концентрациясын 0,2-1 мкм диапазондо жөнгө салууга болот.Адатта, зонд концентрациясы 0,1-0,3 мкм диапазондо оптималдаштырылган.Пример менен зонддун эң жакшы айкалышын табуу үчүн концентрация градиентинин эксперименттерин жүргүзүүгө болот.
Эскертүүлөр
1.UNG ферментин ПТР күчөтүү реакциясына чейин реакция системасынан булганган dUTP күчөтүү продуктуларын алып салуу, андан кийин продукттун булганышынан улам жалган оң натыйжаларды болтурбоо үчүн колдонсо болот.
2.Булганууга каршы ПЦР реакциясында колдонула турган UNG ферментинин оптималдуу температурасы 2 мүнөткө 50 ℃;инактивациялоо шарты 95 ℃ 5 мүнөт.
3.Тез-тез тоңуп-эрүүдөн качыңыз жана температуранын чоң өзгөрүүсүнө дуушар болбоңуз.
4.Күчөтүлө турган ар кандай гендердин dUTP колдонуу эффективдүүлүгү жана UNG ферментине сезгичтиги ар кандай болот, ошондуктан, эгерде UNG тутумун колдонуу аныктоо сезгичтигинин төмөндөшүнө алып келсе, реакция системасы оңдолуп, оптималдаштырылышы керек, эгер сизге техникалык колдоо керек болсо, кайрылыңыз. биздин компания.
