Superstart qPCR Premix плюс-UNG
Cat №: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG - бул лиофилизация процесстери үчүн атайын иштелип чыккан зонд негизиндеги аныктоону колдонуу менен реалдуу убакытта ПТР сапаттык жана сандык реакциялары үчүн иштелип чыккан адистештирилген реагент.Анын курамында жаңы ысык баштоо ферменти Hotstart Taq plus (DG) камтылган, анын Taq ферментинин активдүүлүгү бөлмө температурасында мөөрлөнүп, төмөнкү температуранын шарттарында праймердин спецификалык эмес күйгүзүлүшү же праймер димеринин пайда болушунан келип чыккан спецификалык эмес күчөтүүнү эффективдүү бөгөттөйт. күчөтүү реакциясынын өзгөчөлүгү.Бул реагент qPCR реакцияларынын эффективдүүлүгүн жана сезгичтигин бир топ жакшыртып, тез ысык баштоого жетишүү үчүн оптималдаштырылган qPCR спецификалык буферин жана UNG/dUTP булганууга каршы системасын колдонот.Ал сандык көрсөткүчтөрдүн кеңири диапазондорунда жакшы стандарттуу ийри сызыктарды ала алат жана калдык ПТР продуктуларынан же аэрозолдук булгануудан келип чыккан жалган позитивдүү күчөтүүнү эффективдүү алдын алуу менен сандык эсептөөнү так аткара алат.Бул реагент Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad жана Roche ж.б. сыяктуу өндүрүүчүлөрдүн флуоресценттик сандык ПТР приборлору менен шайкеш келет жана лиофилизацияланган формада жакшы туруктуулукту көрсөтөт.
Реагенттин курамы
1. 5×HotstartPremix плюс-UNG (Mg2+бекер) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×лиопротектор (милдеттүү эмес)
Сактоо шарттары
-20 ℃ узак мөөнөттүү сактоо;4℃ температурада 3 айга чейин сактаса болот.Колдонуу алдында жакшылап аралаштырып жанакайталап тоңдуруу жана эритүү качуу.
Cycling Protocol
| Процедура | Темп. | Убакыт | Цикл |
| Тамак сиңирүү | 50℃ | 2 мүн | 1 |
| Полимеразды активдештирүү | 95℃ | 1~5 мүн | 1 |
| Денатура | 95℃ | 10~20 с | 40-50 |
| Жылуулоо жана узартуу | 56~64℃ | 20~60 с | 40-50 |
qPCR суюктук реакциясы Syтамыр даярдоо
|
Курамы |
25μL Көлөм |
50μL Көлөм |
Акыркы концентрация |
| 5×HotstartPremix плюс-UNG(Mg2+бекер) (DG) | 5μL | 10μL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0.45μL | 0.9μL | 4,5 мм |
| 4×лиопротектор1 | 6.25μL | 12.5μL | 1× |
| 25×Праймер-Зонд аралашмасы2 | 1μL | 2μL | 1× |
| Үлгү ДНК3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25μл чейин | 50μл чейин | —— |
1. Примерлер үчүн 0,2μM акыркы концентрациясы, адатта, жакшы натыйжаларды берет;реакциянын иштеши начар болгондо, праймердин концентрациясын 0,2-1μM диапазондо тууралаңыз.Зонддун концентрациясы, адатта, оптималдуу айкалыштарды табуу үчүн градиенттик эксперименттер аркылуу 0,1-0,3μM диапазонунда оптималдаштырылат.
2. Калыптардын ар кандай түрлөрүндө камтылган максаттуу гендердин көчүрмөлөрүнүн саны ар кандай болот;зарыл болсо, оптималдуу шаблон кошуу суммасын аныктоо үчүн градиент суюлтуу аткарылышы мүмкүн.
3. Бул системаны лиофилизациялоого болот;кардарлар бул системаны тоңдуруу-кургатуу талаптары жок колдонгондо, 4 × лиопротектор тандалып кошулушу мүмкүн; эгерде тоңдурулуп кургатылган продуктулар талап кылынса, суюк реагенттер стадиясында продуктунун натыйжалуулугун текшерүү учурунда, лиофилизацияланган системанын компоненттери менен шайкеш келүүсүн камсыз кылуу үчүн 4 × лиопротектор кошуу керек. жана эффекттер.
Система колдонулгандаг муздатып кургатуу үчүн, даярдоо системасы as төмөнкү:
| Курамы | 25µL Реакция системасы |
| 5 ×HotstartPremix плюс-UNG (Mg2+бекер) (DG) | 5μL |
| 250mM MgCl2 | 0.45μL |
| 4×лиопротектор | 6.25μL |
| 25×Праймер-Зонд аралашмасы | 1μL |
| ddH2O | 18~20μл чейин |
* Эгерде тоңдурулуп кургатуу үчүн башка системалар керек болсо, өзүнчө кеңеш алыңыз.
Лиофилизация процессиss
| Процедура | Темп. | Убакыт | Шарт | басым |
| Алдын ала муздатуу | 4℃ | 30 мүнөт | кармап туруңуз |
1 атм |
| -50℃ | 60 мин | Муздатуу | ||
| -50℃ | 180 мин | кармап туруңуз | ||
| Негизги кургатуу | -30℃ | 60 мин | Жылытуу |
Ultimate Vacuum |
| -30℃ | 70 мин | кармап туруңуз | ||
| Экинчи кургатуу | 25℃ | 60 мин | Жылытуу |
Ultimate Vacuum |
| 25℃ | 300 мин | кармап туруңуз |
2. Жогорудагы лиофилизация процесси маалымдама үчүн гана.Продукциянын ар кандай түрлөрү жана ар кандай тоңдургуч кургаткычтар ар кандай параметрлерге ээ, ошондуктан иш жүзүндөгү өнүмгө ылайык тууралоолорду жасоого болот.пайдалануу учурунда шарттар.
3. Ар кандай лиофилизация процесстери лиофилизацияланган ар кандай өлчөмдөгү партиялар үчүн ылайыктуу болушу мүмкүн.продуктылар, ошондуктан ири масштабдуу өндүрүш үчүн колдонулганда жетиштүү сыноо валидациясы жүргүзүлүшү керек.
Лиофилизаны колдонуу боюнча нускамаг порошок
1. Лиофилизацияланган порошокту кыскача центрифугалоо;
2. Лиофилизацияланган порошокко нуклеин кислотасынын шаблонун кошуп, 25 мкл чейин суу кошуңуз;
3. Центрифугалоо жолу менен жакшылап аралаштырыңыз жана машинада иштетиңиз.
Сапатты көзөмөлдөө:
1. Функционалдык тестирлөө: qPCRдин сезгичтиги, спецификасы, кайталанышы.
2. Экзогендик нуклеаздык активдүүлүк жок, экзогендик эндо/экзонуклеаза булгануусу жок.
Техникалык маалымат:
1. Superstart qPCR Premix плюс-UNG 1~5 мүнөт ичинде тез ысык баштоого мүмкүндүк берген жаңы ысык-баштоо ферментин колдонот;атайын буфердик формула аркылуу мультиплекстүү флуоресценттик сандык ПТР реакциялары үчүн ылайыктуу.
2. Бул флуоресценттик сандык ПТР чегин аныктоонун сезгичтигин олуттуу түрдө жакшыртат, күчөтүү ийри сызыктарын нормалдаштырат, флуоресценциянын мааниси аз концентрациялуу шаблондордо ачык жакшырды, жогорку сезгичтүү флуоресценттик сандык ПТР аныктоо реагенттери катары ылайыктуу.
3. Тамырлоо температурасы төмөн же 200bp фрагменттеринен узунураак праймерлер үчүн 3 кадамдуу ыкма сунушталат.
4. dUTP колдонуунун эффективдүүлүгү жана UNG ферментине сезгичтиги ар кандай максаттуу гендер үчүн айырмаланат, ошондуктан UNG системасын колдонуу аныктоо сезгичтигинин төмөндөшүнө алып келсе, реакция системасын тууралоо жана оптималдаштыруу керек.Эгерде техникалык колдоо керек болсо, биздин компания менен байланышыңыз.
5. Күчөтүү алдында жана андан кийин атайын жерлерди жана пипеткаларды колдонуңуз, операция учурунда колкап кийиңиз жана аларды тез-тез алмаштырыңыз;үлгүлөрдүн ПТР продуктулары менен булганышын азайтуу үчүн ПТР аяктагандан кийин реакция түтүгүн ачпаңыз.
