2×HiF Taq плюс Master Mix
Cat №: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (Боёк менен) бул колдонууга даяр 2 × алдын ала аралаштырылган эритме, камтыган Plus HIF ДНК Полимераза, dNTPs жана оптималдаштырылган буфер.Полимераздын активдүүлүгүн жана 3′→5′экзонуклеазанын активдүүлүгүн бөгөттөөчү бөлмө температурасында эки моноклоналдык антителолор оңой жана жогорку спецификалык Hot Start PCR үчүн мастер аралашмага кошулат.Ферментке узун фрагментти күчөтүү жөндөмдүүлүгүн берүү үчүн кеңейтүү фактору мастер аралашмага кошулат, күчөтүүнүн узундугу 13 кб чейин болушу мүмкүн, ферменттин 5′→3′ ДНК полимераза активдүүлүгү жана 3′→5′ экзонуклеаза активдүүлүгү, анын ишенимдүүлүгү Так ДНК полимеразасынан 83 эсе, бул кадимки ДНК полимеразасынан 9 эсе.Бул татаал шаблондорду күчөтүү үчүн ылайыктуу, күчөтүү продукту - бул туңгуюк аягы.
2×HIF Taq плюс Master Mix(Боёк менен) тез жана оңой, жогорку сезгичтик, күчтүү өзгөчөлүк, жакшы туруктуулук ж. кадам протоколу, эксперименттик кадамдарды жөнөкөйлөтүү жана убакытты үнөмдөө.Бул продукт электрофорез индикатордук боёкторду камтыйт, жана ПЦР продуктулары түздөн-түз электрофорез үчүн колдонулушу мүмкүн.Мындан тышкары, продукт белгилүү бир коргоочу агентти камтыйт, андыктан мастер-микс кайталанган тоңдуруудан кийин туруктуу иш-аракетти сактай алат.
Сактоо шарттары
Продукциялар -25~-15℃ температурада 1 жыл сакталышы керек.
Техникалык шарттар
| Өнүмдүн сыпаттамасы | Master Mix |
| Концентрация | 2× |
| Hot Start | Камтылган Hot Start |
| Overhang | Блант |
| Реакция ылдамдыгы | Rapid |
| Көлөм (акыркы продукт) | 13 кб чейин |
| Ташуу шарттары | Кургак муз |
| Продукт түрү | Жогорку тактыктагы ПЦР премикстери |
Instructions
1.ПЦР реакция системасы
| Компоненттер | Көлөмү (мкл) |
| ДНК шаблону | Ылайыктуу |
| Алдыга праймер (10 мкмоль/л) | 2.5 |
| Тескери праймер (10 мкмоль/л) | 2.5 |
| 2×HIF Taq плюс Master Mix | 25 |
| ddH2O | 50гө чейин |
2.Ар кандай шаблондорду колдонуу сунушталат
| Үлгүнүн түрү | Фрагменттерди 1кбдан 10 кбга чейин күчөтүңүз |
| Геномдук ДНК | 50-200 нг |
| Плазмида же вирустук ДНК | 10пг-20нг |
| cDNA | 1-2,5 мкл (акыркы ПТР реакциясынын көлөмүнүн 10% ашпаңыз) |
3.Күчөтүү протоколу
1) Эки кадамдуу протокол (татаалдуулук шаблону)
| Цикл кадамы | Темп. | Убакыт | Циклдер |
| Баштапкы денатурация | 98℃ | 3 мин | 1 |
| Денатурация | 98℃ | 10сек | 30-35 |
| Кеңейтүү | 68℃ | 30 сек/кб | |
| Акыркы узартуу | 72℃ | 5 мүнөт | 1 |
2) Үч кадамдуу протокол (кадимки протокол)
| Цикл кадамы | Темп. | Убакыт | Циклдер |
| Баштапкы денатурация | 98℃ | 3 мин | 1 |
| Денатурация | 98℃ | 10сек | 30-35 |
| Жылуулоо | 60℃ | 20 сек | |
| Кеңейтүү | 72℃ | 30 сек/кб | |
| Акыркы узартуу | 72℃ | 5 мүнөт | 1 |
3) Градиентти күйдүрүү протоколу (татаалдуулук шаблону)
| Цикл кадамы | Температура | Убакыт | Циклдер |
| Баштапкы денатурация | 98℃ | 3 мин | 1 |
| Денатурация | 98℃ | 10 сек | 15 (Циклге 1℃ кыскартуу) |
| Градиенттик күйгүзүү | 70-55℃ | 20 сек | |
| Кеңейтүү | 72℃ | 30 сек/кб | |
| Денатурация | 98℃ | 10 сек |
20 |
| Жылуулоо | 55℃ | 20 сек | |
| Кеңейтүү | 72℃ | 30 сек/кб | |
| Акыркы узартуу | 72℃ | 5 мүнөт | 1 |
Ар кандай күчөтүү протоколуна ылайык өзгөчөлүктөр
| Протокоl | Эки кадам | Үч кадам | Градиенттик күйгүзүү |
| Spec. | тез | орто | жай |
| Өзгөчөлүк | бийик | орто | бийик |
| ПЦР кирешеси | орто | бийик | орто |
| Аныктоо ылдамдыгы | бийик | орто | бийик |
Эскертүүлөр
Сураныч, ден соолугуңузду жана коопсуздугуңузду камсыз кылуу үчүн керектүү ЖККны, лабораториялык халатты жана кол каптарды кийиңиз!
