UDG/UNG ферменттери
UDG (урацил ДНК гликозилаза) ssDNA жана dsDNAдагы урацил базасы менен кант-фосфат омурткасынын ортосундагы N-гликозиддик байланыштын гидролизине катализ кыла алат.Ал аэрозолдун булганышын оңой башкара алат жана ПТР, qPCR, RT-qPCR жана LAMP сыяктуу жалпы молекулярдык биология системалары үчүн ылайыктуу.
Техникалык шарттар
| Expression Host | Урацил ДНК гликозилаза гени менен рекомбинант E. coli |
| Молекулярдык Салмак | 24. 8кДа |
| Тазалык | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Жылуулук инактивациялоо | 95℃, 5~10 мүн |
| Бирдиктин аныктамасы | Бир бирдик (U) 25 ℃ температурада 30 мүнөт ичинде l μg dU камтыган dsDNAнын гидролизин катализдөө үчүн зарыл болгон ферменттин көлөмү катары аныкталат. |
Сактагыч
продукт -25 ℃ ~ -15 ° C эки жыл сакталышы керек.
Instructions
1.ПЦР реакциясынын аралашмасын төмөнкү система боюнча даярдоо
| Компоненттер | Көлөмү (мкл) | Акыркы концентрация |
| 10×PCR буфери (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 ммоль/LMgCl | 3 | 1,5 ммоль/л |
| dUTP(10 ммоль/л) | 3 | 0,6 ммоль/л |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10ммоль/Силүү) | 1 | 0,2 ммоль/Силсиздик |
| Үлгү ДНК | X | - |
| Primer1 (10мкмоль/л) | 2 | 0,4 мкмоль/л |
| Праймер 2 (10мкмоль/л) | 2 | 0,4 мкмоль/л |
| Так ДНК Полимераза (5 U/мкл) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil ДНК гликозилаза (UDG/UNG), 1 U/мкл | 1 | 1 U/мкл |
| ddH₂O | 50гө чейин | - |
Эскертүү: Эксперименттик талаптарга ылайык, dUTP акыркы концентрациясы 0,2-0,6 ммоль/л ортосунда жөнгө салынышы мүмкүн, жана 0,2 ммоль/л dTTP тандап кошууга болот.
2.Күчөтүү процедурасы
| Цикл кадамы | Температура | Убакыт | Циклдер |
| dU камтыган шаблондун бузулушу | 25℃ | 10мин | 1 |
| UDG активдештирүү, шаблондун баштапкы денатурациясы | 95℃ | 5~10мин | 1 |
| Денатурация | 95℃ | 10 сек |
30-35 |
| Жылуулоо | 60℃ | 20 сек | |
| Кеңейтүү | 72℃ | 30сек/кб | |
| Акыркы узартуу | 72℃ | 5 мүнөт | 1 |
Эскертүү: 25 ° C реакция убактысы эксперименттик талаптарга ылайык 5-10мин ичинде жөнгө салынышы мүмкүн.
Эскертүүлөр
1.UDG көпчүлүк ПТР реакция буферлеринде активдүү.
2.Ферменттер колдонулганда муз кутусунда же муз ваннасында сакталышы керек жана колдонулгандан кийин дароо -20°C температурада сакталышы керек.
3.Сураныч, ден соолугуңузду жана коопсуздугуңузду камсыз кылуу үчүн керектүү ЖККны, лабораториялык халатты жана кол каптарды кийиңиз!
