Rnase ингибитору (глицеринсиз)
Murine RNase ингибитору - E.coliден экспрессияланган жана тазаланган рекомбинантты чычкан RNase ингибитору.Ал RNase A, B же C менен 1:1 катышында коваленттүү эмес байланыш аркылуу байланышат, ошону менен үч ферменттин активдүүлүгүн токтотот жана РНКны бузулуудан коргойт.Бирок, бул RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H же Aspergillus RNase каршы натыйжалуу эмес.Murine RNase ингибитору RT-PCR, RT-qPCR жана IVT mRNA тарабынан сыналган жана ар кандай коммерциялык Reverse transscriptases, ДНК полимеразалары жана РНК полимеразалары менен шайкеш келген.
Адамдын RNase ингибиторлору менен салыштырганда, чычкан RNase ингибиторунда ингибитордун инактивацияланышын шарттаган кычкылданууга өтө сезгич эки цистеин жок.Бул DTT төмөн концентрациясында (1 мМден аз) аны туруктуу кылат.Бул өзгөчөлүк аны DTT жогорку концентрациялары реакцияга тескери болгон реакцияларда колдонууга ылайыктуу кылат (мисалы, реалдуу убакыттагы RT-PCR).
Aколдонмо
Бул продукт РНКнын деградациясын болтурбоо үчүн RNase кийлигишүүсү мүмкүн болгон ар кандай экспериментте кеңири колдонулушу мүмкүн, мисалы:
1.Биринчи катардагы кДНК синтези, RT-PCR, RT-qPCR ж.б.;
2.РНКны in-vitro транскрипциясында/трансляциясында бузулуудан коргоо (мисалы, in vitro вирустук репликация);
3.РНКны изоляциялоо жана тазалоо учурунда RNase активдүүлүгүн бөгөт коюу.
Сактоо шарттары
-25～-15℃ температурада сактоо;
Тоңдуруу-эритүү циклдары ≤ 5 жолу;
1 жылга жарактуу.
Бирдиктин аныктамасы
Бир бирдик RNase A нын 5 нг активдүүлүгүн 50% бөгөт коюу үчүн зарыл болгон RNase Ингибиторунун өлчөмү катары аныкталат.
Молекулярдык салмак
RNase ингибитору (глицеролсуз) - 50 кДа протеин.
Сапатты контролдоо
Экзонуклеаза Иш-аракет:
40 U ферментти 1 мкг λ-Hind III дайджест ДНКсы менен 37°Cде 16 саат бою инкубациялоо гель электрофорези менен аныкталгандай ДНКнын деградациясын аныктаган жок.
Эндонуклеазанын активдүүлүгү:
40 U ферментти 1 мкг λ ДНК менен 16 саат бою 37°Cде инкубациялоо гель электрофорези менен аныкталгандай ДНКнын деградациясын аныктаган жок.
Nicking Иш-аракет:
40 U ферментти 1 мкг pBR322 менен 37 ℃ температурада 16 саат бою инкубациялоо гель электрофорези менен аныкталгандай ДНКнын деградациясын аныктоого мүмкүн болгон жок.
RNase Активдүүлүк:
40 U ферментти 1,6 мкг MS2 РНК менен 4 саат бою 37 ℃ температурада инкубациялоо гель электрофорези менен аныкталгандай РНКнын деградациясын аныктоого мүмкүн болгон жок.
E.coli ДНКсы:
40 U Enzyme TaqMan qPCR тарабынан аныкталат.E.coli ДНКсы ≤ 0. 1pg/40U.
Nотеs
1. Ферменттин инактивацияланышына жол бербөө үчүн катуу чайкабаңыз же аралаштырбаңыз.
2.RNase ингибитору 25℃ден 55℃ге чейинки температурада активдүү жана ≥65℃де активдештирилбейт.
3.RNase H, RNase 1 жана RNase T1 активдүүлүгү бөгөттөлбөйт.
4.RNase активдүүлүгүнө бөгөт коюу үчүн рН диапазону кенен (рН 5-9да активдүү), рН 7-8де максималдуу активдүүлүктү көрсөтөт.
