Bst 2.0 ДНК Полимераза (Глицерол жок)
Bst ДНК полимераза V2 Bacillus stearothermophilus ДНК Полимераза Iден алынган, ал 5′→3′ ДНК полимераза активдүүлүгүнө жана күчтүү чынжыр алмаштыруу активдүүлүгүнө ээ, бирок 5′→3′ экзонуклеаза активдүүлүгү жок.Bst DNA Polymerase V2 жипти алмаштыруу, изотермикалык күчөтүү LAMP (Loop mediated isothermic amplification) жана тез секвенирлөө үчүн идеалдуу ылайыктуу.
Компоненттер
| Компонент | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (Глицерол жок) (8U/мкл) | 0,2 мл | 1 мл | 10 мл |
| 10×HC Bst V2 буфери | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 3×10 мл |
| MgSO4(100мМ) | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 2×10 мл |
Тиркемелер
1.LAMP изотермикалык күчөтүү
2.ДНК тилкесинин бир орун алмаштыруу реакциясы
3.High GC ген секвенирлөө
4.Нанограмма деңгээлинин ДНК секвенциясы.
Сактоо абалы
0 ° C астында ташуу жана -25 ° C ~ -15 ° C сакталат.
Бирдиктин аныктамасы
Бир бирдик 65°С температурада 30 мүнөттө кислотада эрибеген материалга 25 нмоль dNTP киргизген ферменттин саны катары аныкталат.
Сапатты көзөмөлдөө
1.Белоктун тазалыгынын анализи (SDS-PAGE):Bst ДНК полимераза V2 тазалыгы ≥99% Coomassie Blue аныктоо аркылуу SDS-PAGE анализи менен аныкталат.
2.Экзонуклеазанын активдүүлүгү:Минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 камтыган 50 мкл реакцияны 1 мкг λ -Hind Ⅲ дайджест ДНКсы менен 37 ℃ температурада 16 саатка инкубациялоо аныкталгандай эч кандай деградацияга алып келбейт.
3.Nickase Activity:Минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 камтыган 50 мкл реакцияны 1 мкг pBR322 ДНКсы менен 37°Cде 16 саатка инкубациялоо аныкталгандай деградацияга алып келбейт.
4.RNase Activity:Минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 камтыган 50 мкл реакцияны 1,6 мкг MS2 РНК менен 37°C температурада 16 саатка инкубациялоо аныкталгандай деградацияга алып келбейт.
5.E. coli ДНКсы:120 U Bst ДНК полимераза V2 E. coli геномдук ДНКсынын бар экендиги үчүн E. coli 16S рРНК локусуна мүнөздүү праймерлер менен TaqMan qPCR аркылуу текшерилет.E. coli геномдук ДНК булганышы ≤1 копия болуп саналат.
LAMP реакциясы
| Компоненттер | 25мкл |
| 10×HC Bst V2 буфери | 2,5 мкл |
| MgSO4 (100мМ) | 1,5 мкл |
| dNTPs (ар бири 10мМ) | 3,5 мкл |
| SYTO™ 16 Жашыл (25×)a | 1,0 мкл |
| Праймер аралашмасыb | 6 мкл |
| Bst ДНК Полимераз V2 (Глицеролсуз) (8 U/uL) | 1 мкл |
| Шаблон | × мкл |
| ddH₂O | 25 мкл чейин |
Эскертүүлөр:
1) а.SYTOTM 16 Green (25×): эксперименталдык муктаждыктарга ылайык, башка боёкторду алмаштыруучу катары колдонсо болот;
2) б.Праймер аралашмасы: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB жана башка көлөмдөрдү аралаштыруу менен алынган.
Реакция жана шарт
1 × HC Bst V2 Buffer, инкубациялоо температурасы 60°C жана 65°C ортосунда.
Жылуулук инактивациялоо
80 °C，20мин
