DNase I (Rnase Free)(5u/ul)
Cat №: HC4007A
DNase I (Дезоксирибонуклеаза I) бир же эки тилкелүү ДНКны сиңире алган эндодеоксирибонуклеаза.Ал 5'-терминалында фосфат топтору бар монодезоксинуклеотиддерди же бир же эки спиралдуу олигодеоксинуклеотиддерди жана 3'-терминалында гидроксилдерди пайда кылуу үчүн фосфодиэстер байланыштарын тааныйт жана ажыратат.ДНаза I активдүүлүгү Садан көз каранды2+жана Mn сыяктуу эки валенттүү металл иондору менен активдештирилиши мүмкүн2+жана Zn2+.5 мМ Ca2+ферментти гидролизден коргойт.Мгнын катышуусунда2+, фермент туш келди таанып, ДНКнын каалаган тилкесиндеги каалаган жерди ажырата алган.Мн катышуусунда2+, ДНКнын кош тилкелери бир эле учурда таанылып, дээрлик бир жерде ажырап, жалпак учу ДНК фрагменттерин же 1-2 нуклеотиддери чыгып турган жабышчаак учу ДНК фрагменттерин пайда кылышы мүмкүн.
Компоненттер
| аты | 0.1KU | 1KU | 5 КУ | 50 KU |
| DNase I, RNase жок | 20мкл | 200мкл | 1 мл | 10 мл |
| 10×DNase I буфери | 1 мл | 1 мл | 5 × 1 мл | 5 × 10 мл |
Сактоо шарттары
-25 ℃ ~ -15 ℃ сактоо үчүн;Муз пакеттеринин астында ташуу.
Instructions
1. Реакция эритмени RNase-эркин түтүктө төмөндө көрсөтүлгөн пропорцияларга ылайык даярдаңыз:
| Компонент | Көлөм |
| РНК | X мкг |
| 10 × DNase I буфери | 1μL |
| DNase I, RNase жок(5U/мкл) | 1 U ар µг РНК① |
| ddH2O | 10 мкл чейин |
Эскертүү: ①РНКнын көлөмүнө жараша кошула турган DNase I көлөмүн эсептеңиз.
2. 37 ℃ 15 мүнөт;
3. Реакцияны токтотуу үчүн 2,5мМ~5мМ акыркы концентрациясына 0,5М ЭДТА кошуп, 65℃ температурада 10 мүнөт ысытыңыз.Үлгү тескери транскрипция сыяктуу кийинки реакция үчүн түздөн-түз колдонулушу мүмкүнэксперимент.
Бирдиктин аныктамасы
Бир бирдик 1μг pBR322ди толугу менен буза турган ферменттин көлөмү катары аныкталат37℃ температурада 10 мүнөттө ДНК.
Сапатты көзөмөлдөө
RNase:1,6μг MS2 РНКсы бар 5U DNase I 37℃ температурада 4 саат бою деградацияга алып келбейт.агароз гел электрофорези менен аныкталат.
Эскертүүлөр
1. Сураныч, 0.5MEDTAны өзүңүз даярдаңыз.
2. РНКнын мкг үчүн 1U DNase I колдонуңуз.Бирок, эгерде РНК 1μг аз болсо, 1U DNase I колдонуңуз.
3. Иштеп жатканда ферментти муздун үстүнө коюңуз.
