2×PCR Master Mix (боёксуз)
PCR Master Mix колдонууга даяр кадимки ПТР алдын ала аралаштырылган эритмесинин бир түрү, анын ичинде Taq DNA Polymerase, dNTP mix MgCl2 жана оптималдаштырылган буфер.Реакция учурунда күчөтүү үчүн праймерди жана шаблонду гана кошууга болот, бул эксперименттин операция кадамдарын абдан жөнөкөйлөтөт.Бул продукт мыкты стабилизаторлорду камтыйт жана 4℃ температурада 3 айга сакталат.ПТР продуктусу 3′-дА протрузияга ээ жана Т векторуна оңой клондолот.
Сактоо шарттары
Продукт -25℃~-15℃ температурада эки жыл сакталышы керек.
Техникалык шарттар
| Fidelity (Vs.Taq) | 1× |
| Hot Start | No |
| Overhang | 3′-А |
| Полимераз | Так ДНК полимераза |
| Реакция форматы | SuperMix же Master Mix |
| Реакция ылдамдыгы | Стандарт |
| Продукт түрү | PCR Master Mix (2×) |
Instructions
1.Реакция системасы
| Компоненттер | Өлчөмү (мкл) |
| Үлгү ДНК | Ылайыктуу |
| Primer 1 (10 мкмоль/л) | 2 |
| Primer 2 (10 мкмоль/л) | 2 |
| PCR Master Mix | 25 |
| ddH2O | 50гө чейин |
2.Күчөтүү протоколу
| Цикл кадамдары | Температура (°C) | Убакыт | Циклдер |
| Алдын ала денатурация | 94 ℃ | 5мин | 1 |
| Денатурация | 94 ℃ | 30 сек | 35 |
| Жылуулоо | 50-60 ℃ | 30 сек | |
| Кеңейтүү | 72 ℃ | 30-60сек/кб | |
| Акыркы узартуу | 72 ℃ | 10мин | 1 |
Эскертүүлөр:
1) Шаблонду колдонуу: 50-200 нг геномдук ДНК;0,1-10 нг плазмиддик ДНК.
2) Mg2+концентрациясы: Бул продукт көпчүлүк ПТР реакциялары үчүн ылайыктуу 3 мМ MgCl2 камтыйт.
3) Күйүү температурасы: Примерлердин теориялык Tm маанисин караңыз.Күйүү температурасын праймердин теориялык маанисинен 2-5 ℃ төмөн коюуга болот.
4) Узартуу убактысы: Молекулярдык идентификация үчүн 30 сек/кб сунушталат.Гендерди клондоо үчүн, 60сек/кб сунушталат.
Эскертүүлөр
1.Сиздин коопсуздугуңуз жана ден соолугуңуз үчүн лабораториялык халаттарды жана операция үчүн бир жолу колдонулуучу кол каптарды кийиңиз.
2.изилдөө үчүн гана!
