Чычкандын генотиптөө комплекти

Cat №: HCR2021A

Бул продукт чычкандардын генотиптерин, анын ичинде ДНКны чийки экстракциялоо жана ПТР күчөтүү системасын тез аныктоо үчүн иштелип чыккан комплект.Продукцияны лизис буфери жана протеиназа к аркылуу жөнөкөй бөлгөндөн кийин чычкандын куйругу, кулак, манжа жана башка кыртыштардан түздөн-түз ПТР күчөтүү үчүн колдонсо болот.Түнкү сиңирүү, фенол-хлороформ алуу же колонка тазалоо жок, бул жөнөкөй жана эксперименттердин убактысын кыскартат.Продукт 2 кб чейин максаттуу фрагменттерди күчөтүү жана 3 жупка чейин праймерлер менен мультиплекстик ПТР реакциялары үчүн ылайыктуу.2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix гендик инженерия ДНК полимеразаны камтыйт, Mg²⁺, dNTPs жана оптималдаштырылган буфердик система, жогорку күчөтүү эффективдүүлүгүн жана ингибиторлорго толеранттуулукту камсыз кылуу үчүн, ПЦР реакциялары шаблонду жана праймерлерди кошуу жана продуктуну 1×ге регидратациялоо аркылуу ишке ашырылышы мүмкүн.Бул продукт менен күчөтүлгөн ПТР продуктунун 3′ аягында көрүнүктүү “А” базасы бар жана аны тазалоодон кийин ТА клондоштуруу үчүн түздөн-түз колдонсо болот.

Компоненттер

Сактоо шарттары

Продукциялар -25~-15℃ температурада 2 жыл сакталышы керек.Эриткенден кийин, Лизис буферин кыска мөөнөттүү көп колдонуу үчүн 2~8℃ температурада сактоого болот жана колдонууда жакшылап аралаштырууга болот.

Колдонмо

Бул продукт чычкан нокаут талдоо үчүн ылайыктуу, трансгендик аныктоо, генотип жана башкалар.

Өзгөчөлүктөрү

1.Жөнөкөй операция: геномдук ДНКны бөлүп алуунун кереги жок;

2.Кеңири колдонуу: ар кандай чычкан ткандарын түз күчөтүү үчүн ылайыктуу.

Instructions

1.Геномдук ДНКнын чыгышы

1) Лизатты даярдоо

Ткань лизаты лиздентиле турган чычкан үлгүлөрүнүн санына жараша даярдалат (ткандын лизаты дозага ылайык жеринде даярдалып, колдонуу үчүн кылдат аралаштырылышы керек) жана бир үлгү үчүн зарыл болгон реагенттердин үлүшү төмөнкүдөй:

2) Үлгү даярдоо жана лизис

Сунушталган кыртыштарды колдонуу

Таза центрифуга түтүктөрүнө чычкан кыртышынын үлгүлөрүнүн тиешелүү көлөмүн алып, ар бир центрифуга түтүгүнө 200 мкл жаңы кыртыш лизатын кошуп, айлантып, чайкаңыз, андан кийин 55 ℃ температурада 30 мүнөт инкубациялаңыз, андан кийин 98 ℃ температурада 3 мүнөт ысытыңыз.

3) Центрифугалоо

Лизатты жакшылап чайкап, 12000 айн/мин ылдамдыгында 5 мүнөткө центрифугалаңыз.Супернатантты ПЦР күчөтүү үчүн шаблон катары колдонсо болот.Эгер калып сактоо үчүн керек болсо, үстүнкү затты башка стерилдүү центрифуга түтүгүнө өткөрүп, -20℃ температурада 2 жума сактаңыз.

2.ПЦР күчөтүү

2×чычкан кыртышынын түз ПТР аралашмасын -20℃ден алып салыңыз жана музда эритип, тескери аралаштырыңыз жана төмөнкү таблицага ылайык ПТР реакция системасын даярдаңыз (музда иштөө):

Эскертүү:

a) Кошулган сумма системанын 1/10 бөлүгүнөн ашпашы керек жана өтө көп кошулса, ПТР күчөтүүсүнө бөгөт коюлушу мүмкүн.

Сунушталган ПТР шарттары

Эскертүү:

a) Жылдыруу температурасы: Праймердин Tm маанисине шилтеме кылуу менен, күйдүрүү температурасын праймердин азыраак Tm маанисине +3~5℃ коюу сунушталат.

Жалпы көйгөйлөр жана чечимдер

1.Максаттуу тилкелер жок

1) Ашыкча лизис продукт.Калыптын эң ылайыктуу көлөмүн тандаңыз, эреже катары, системанын 1/10 бөлүгүнөн көп эмес;

2) Өтө чоң үлгү өлчөмү.Лизатты 10 жолу суюлтуңуз жана андан кийин чоңойтуңуз, же үлгүнүн өлчөмүн азайтыңыз жана кайра лизис жасаңыз;

3) кыртыштын үлгүлөрү жаңы эмес.Бул жаңы кыртыш үлгүлөрүн колдонуу сунуш кылынат;

4) Праймердин сапаты начар.Примердин сапатын текшерүү жана праймер дизайнын оптималдаштыруу үчүн күчөтүү үчүн геномдук ДНКны колдонуңуз.

2.Спецификалык эмес күчөтүү

1) Күйүү температурасы өтө төмөн жана цикл саны өтө жогору.күйгүзүү температурасын жогорулатуу жана циклдердин санын азайтуу;

2) Калыптын концентрациясы өтө жогору.Калыптын көлөмүн азайтыңыз же күчөтүлгөндөн кийин шаблонду 10 жолу суюлтуңуз;

3) Праймердин өзгөчөлүгү начар.Праймер дизайнын оптималдаштыруу.

Эскертүүлөр

1.Үлгүлөрдүн ортосунда кайчылаш булганууну болтурбоо үчүн, бир нече үлгүлөрдү алуу үчүн шаймандар даярдалышы керек, эгерде кайталап колдонуу талап кылынса, ар бир үлгү алуудан кийин шаймандардын үстүн 2% натрий гипохлорит эритмеси же нуклеин кислотасын тазалоочу каражат менен тазалоого болот.

2.Бул жаңы чычкан ткандарын колдонуу сунуш кылынат, жана үлгү алуу көлөмү күчөтүү натыйжаларына таасир этпеши үчүн өтө чоң болбошу керек.

3.Лизис буфери тез-тез тоңуп-эрүүдөн алыс болушу керек жана кыска мөөнөттүү көп колдонуу үчүн 2~8℃ температурада сакталышы мүмкүн.Төмөн температурада сакталган болсо, жаан пайда болушу мүмкүн жана колдонуудан мурун толугу менен эритүү керек.

4.ПЦР аралашмасы бат-баттан тоңуп-эрүүдөн качышы керек жана кыска мөөнөттүү кайталап колдонуу үчүн 4℃ температурада сакталышы мүмкүн.

5.Бул продукт илимий эксперименталдык изилдөө үчүн гана жана клиникалык диагностикада же дарылоодо колдонулбашы керек.