Вирустук ДНК/РНК экстракциясы
Бул комплект мурун жуткундун тампондору, экологиялык тампондор, клетка культурасынын супернатанты жана кыртыш гомогенатынын супернатанттары сыяктуу үлгүлөрдөн жогорку тазалыктагы вирустук ДНК/РНКны тез экстракциялоо үчүн ылайыктуу.Комплект фенол/хлороформ органикалык эриткичтерин же вирустук ДНКны/РНКны жогорку сапаттагы экстракциялоо үчүн көп убакытты талап кылган спирттүү чөктүрүүнү колдонуунун зарылдыгын жок кылган кремний диоксиди мембранасын тазалоо технологиясына негизделген.Алынган нуклеиндик кислоталар кирлерден таза жана тескери транскрипция, ПТР, RT-PCR, реалдуу убакыттагы ПТР, кийинки муундагы секвенирлөө (NGS) жана Түндүк блот сыяктуу ылдыйкы эксперименттерде колдонууга даяр.
Сактоо шарттары
15 ~ 25 ℃ температурада сактоо жана бөлмө температурасында ташуу
Компоненттер
| Компоненттер | 100RXNS |
| Буфер VL | 50 мл |
| RW буфери | 120 мл |
| RNase-эркин ddH2 O | 6 мл |
| FastPure РНК мамычалары | 100 |
| Коллекциялык түтүктөр (2 мл) | 100 |
| RNaseсиз коллекциялык түтүктөр (1 ,5 мл) | 100 |
Буфер VL:лизис жана байланыш үчүн чөйрөнү камсыз кылуу.
RW буфери:Калган белокторду жана башка кирлерди жок кылыңыз.
RNase-эркин ddH2O:Спиндик колоннадагы мембранадан ДНК/РНКны элютуңуз.
FastPure РНК тилкелери:Атап айтканда, ДНК/РНКны адсорбциялайт.
Коллекциялык түтүктөр 2 мл:Фильтрат чогултуу.
RNase-эркин коллекциялык түтүктөр 1,5 мл:ДНК/РНК чогултуу.
Тиркемелер
Насофарингеалдык тампондор, экологиялык тампондор, клетка культурасынын супернатанттары жана ткандардын гомогенаты супернатанттар.
Өзүн-өзү даярдаган Materials
RNase-эркин пипетка учтары, 1,5 мл RNase-эркин центрифугалык түтүктөр, центрифуга, вортекс аралаштыргыч жана пипеткалар.
Эксперимент процесси
Биологиялык коопсуздук кабинетинде төмөнкү кадамдардын баарын аткарыңыз.
1. RNase жок центрифуга түтүкчөсүнө 200 мкл үлгүнү кошуңуз (жетишсиз үлгүдөгү PBS же 0,9% NaCl менен түзүңүз), 500 мкл Buffer VL кошуңуз, 15 – 30 сек бургулоо менен жакшылап аралаштырыңыз жана центрифугалаңыз түтүктүн түбүнө аралашманы чогултуу үчүн кыскача.
2. FastPure РНК мамычаларды чогултуу түтүктөрүнө 2 мл салыңыз.Аралашманы 1-кадамдан FastPure РНК колонналарына өткөрүп, 12 000 айн/мин (13 400 × г) центрифугада 1 мүн жана фильтратты таштаңыз.
3. FastPure РНК колонналарына 600 мкл Buffer RW кошуп, 12 000 айн/мин (13 400 × г) 30 сек центрифугалап, фильтратты таштаңыз.
4. 3-кадамды кайталаңыз.
5. Бош колонканы 12 000 айн/мин (13 400 × г) 2 мүнөткө центрифугалаңыз.
6. FastPure РНК мамычаларын жаңы RNaseсиз Коллекция түтүктөрүнө 1,5 мл (топтомдо берилген) этияттык менен өткөрүп, мамычаны тийгизбестен мембрананын ортосуна 30 – 50 мкл RNase-эркин ddH2O кошуңуз.Бөлмө температурасында 1 мүнөт жана 12 000 айн/мин (13 400 × г) центрифугада 1 мүн.
7. FastPure РНК тилкелерин таштаңыз.ДНК/РНК кийинки анализдер үчүн түздөн-түз колдонулушу мүмкүн, же -30~ -15°Cде кыска мөөнөткө же -85 ~-65°C узак мөөнөткө сакталышы мүмкүн.
Эскертүүлөр
изилдөө үчүн гана.Диагностикалык процедураларда колдонуу үчүн эмес.
1. Алдын ала үлгүлөрдү бөлмө температурасында теңдештириңиз.
2. Вирустар өтө жугуштуу.Сураныч, эксперимент алдында бардык керектүү коопсуздук чаралары көрүлгөнүн текшериңиз.
3. Үлгүнү кайра-кайра тоңдуруудан жана эритүүдөн качыңыз, анткени бул алынган вирустук ДНК/РНКнын деградациясына же түшүмдүн азайышына алып келиши мүмкүн.
4. Өз алдынча даярдалган жабдууларга RNase-эркин пипеткалардын учтары, 1,5 мл RNase-эркин центрифуга түтүктөрү, центрифуга, вортекс аралаштыргыч жана пипеткалар кирет.
5. Комплектти колдонууда лабораториялык халат, бир жолу колдонулуучу латекс колкап жана бир жолу колдонулуучу маска кийиңиз жана RNase менен булгануу коркунучун азайтуу үчүн RNase-эркин чыгымдалуучу материалдарды колдонуңуз.
6. Башкасы көрсөтүлбөсө, бардык кадамдарды бөлмө температурасында аткарыңыз.
Механизм жана иш процесси
