Робустарт Так ДНК Полимераза

Robustart Taq ДНК Полимераза ысык баштоо ДНК полимераза болуп саналат.Бул продукт ПТР системасын даярдоо жана күчөтүү процессинде праймерлердин спецификалык эмес күйгүзүлүшү же праймердин агрегациясынан келип чыккан спецификалык эмес реакцияны жакшыраак токтото албайт.Ошондуктан, ал мыкты өзгөчөлүккө ээ жана аз концентрациялуу шаблондорду күчөтүү үчүн натыйжалуураак жана мультиплекстелген ПТР күчөтүү реакциясы үчүн ылайыктуу.Мындан тышкары, бул продукт абдан жакшы колдонууга ээ жана туруктуу күчөтүү натыйжалары ПТР реакцияларынын ар кандай түрлөрүн алууга болот.

Компоненттер

1.5 U/μL Robustart Taq ДНК полимераза

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ бекер) (милдеттүү эмес)

3.25 мМ MgCl₂(милдеттүү эмес)

* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ акысыз) dNTP жана Mg²+ камтыбайт, dNTP жана MgCl кошуңуз₂реакция системасын даярдоодо.

Сунушталган колдонмолор

1.Тез күчөтүү.

2.Көптөгөн күчөтүү.

3.Канды, тампондорду жана башка үлгүлөрдү түз күчөтүү.

4.Дем алуу органдарынын ооруларын аныктоо.

Сактоо абалы

Узак мөөнөттүү сактоо үчүн -20°C, колдонуудан мурун жакшылап аралаштыруу керек, тез-тез тоңуп-эрүүдөн сактануу керек.

*Муздаткычтан кийин жаан-чачын болсо, бул нормалдуу көрүнүш;аралаштыруунун жана колдонуунун алдында бөлмө температурасында тең салмактуулукту сактоо сунушталат.

Бирдиктин аныктамасы

Бир активдүү бирдик (U) 10 нмоль дезоксирибонуклеотидди калып/праймер катары активдештирилген лосось сперма ДНКсын колдонуу менен 74°C температурада 30 мүнөткө кислотада эрибеген материалга киргизген ферменттин саны катары аныкталат.

Сапатты көзөмөлдөө

1.SDS-PAGE электрофоретикалык тазалыгы 98% дан жогору.

2.Күчөтүү сезгичтиги, партиядан партияга башкаруу, туруктуулук.

3.Экзогендик нуклеаздык активдүүлүк, экзогендик эндонуклеаза же экзонуклеаза булгануусу жок

Instructions

Reaction Setup

Эскертүүлөр:

1) а.Буферде dNTP жана Mg²+ жок, dNTP жана MgCl кошуңуз₂реакция системасын даярдоодо.

2) б.Эгерде qPCR/qRT-PCR үчүн колдонулса, реакция системасына флуоресценттик зонддорду кошуу керек.Адатта, 0,2 мкм акыркы праймер концентрациясы жакшы натыйжаларды берет;реакциянын көрсөткүчү начар болсо, праймердин концентрациясын 0,2-1 мкм диапазондо жөнгө салууга болот.Зонддун концентрациясы адатта 0,1-0,3 мкм диапазондо оптималдаштырылат.Пример менен зонддун эң жакшы айкалышын табуу үчүн концентрация градиентинин эксперименттерин жүргүзүүгө болот.

Термикалык цикл протоколу

Эскертүүлөр

1.Ыкчам ДНК полимеразанын күчөшүнүн ылдамдыгы 1 кб/10 с кем болбошу керек.Температуранын жогорулашы жана төмөндөшүнүн ылдамдыгы, температураны көзөмөлдөө режими жана ар кандай ПТР инструменттеринин жылуулук өткөрүмдүүлүк эффективдүүлүгү абдан айырмаланат, ошондуктан конкреттүү тез ПТР аспабы үчүн оптималдуу реакция шарттарын оптималдаштыруу сунушталат.

2.Система өтө ийкемдүү, өзгөчөлүгү жана сезгичтиги жогору.

3.Жогорку сезгичтүү ПТР аныктоо реагенттери катары колдонууга ылайыктуу жана мультиплекстик ПТР күчөтүү реакцияларында колдонулушу мүмкүн.

4.5′→3′ полимераза активдүүлүгү, 5′→3′ экзонуклеаза активдүүлүгү;3′→5′ экзонуклеаза активдүүлүгү жок;текшерүү функциясы жок.

5.ПТР жана РТ-ПЦР сапаттык жана сандык тестирлөө үчүн ылайыктуу.

6.ПЦР продуктунун 3′ аягы А, аны түздөн-түз T векторуна клондосо болот.

7.Үч этаптуу ыкма күйгүзүү температурасы төмөн праймерлер үчүн же 200 б.п.дан узунураак фрагменттерди күчөтүү үчүн сунушталат.