Вирустун ДНК/РНК экстракциясы
Комплект(HC1009B) кан, сарысу, плазма жана тампон жуугуч суюктук сыяктуу ар кандай суюктук үлгүлөрүнөн жогорку тазалыктагы вирустук нуклеиндик кислоталарды (ДНК/РНК) тез чыгарып, параллелдүү үлгүлөрдү жогорку өндүрүмдүүлүктө иштетүүгө мүмкүндүк берет.Комплект уникалдуу камтылган суперпарамагниттик кремний негизиндеги магниттик мончокторду колдонот.Уникалдуу буфердик системада протеиндердин жана башка аралашмалардын ордуна нуклеиндик кислоталар суутек байланыштары жана электростатикалык байланыштар аркылуу адсорбцияланат.Нуклеиндик кислоталарды адсорбциялаган магниттик мончоктор калган белокторду жана туздарды алып салуу үчүн жуулат.Аз туздуу буферди колдонууда нуклеиндик кислоталар нуклеиндик кислоталарды тез бөлүү жана тазалоо максатына жетүү үчүн магниттик мончоктордон бөлүнүп чыгат.Бүт операция процесси жөнөкөй, тез, коопсуз жана эффективдүү жана алынган нуклеин кислоталары тескери транскрипция, ПТР, qPCR, RT-PCR, RT-qPCR, кийинки муундагы секвенирлөө, биочип анализи, жана башкалар
Сактоо шарттары
15 ~ 25 ℃ температурада сактоо жана бөлмө температурасында ташуу.
Тиркемелер
Кан, сыворотка, плазма, тампон элюенти, ткандардын гомогенаты жана башкалар.
Эксперимент процесси
1. Үлгү иштетүү
1.1 Кан, сыворотка жана плазма сыяктуу суюк үлгүлөрдөгү вирустар үчүн: экстракция үчүн колдонулган 300 мкл супернатант.
2.2 Тампон үлгүлөрү үчүн: Тампон үлгүлөрүн консервациялоочу эритмени камтыган үлгү алуу түтүктөрүнө салыңыз, 1 мүнөт куюндаңыз жана экстракция үчүн 300 мкл супернатантты алыңыз.
1.3 Тканы гомогенаттарындагы, кыртыштарды сиңирүүчү эритмелердеги жана экологиялык үлгүлөрдөгү вирустар үчүн: Үлгүлөрдү 5 -10 мүнөткө туруп, экстракция үчүн 300 мкл супернатант алыңыз.
2. даярдоо даярдоокуюлган реагент
Комплекттен алдын ала таңгакталган реагенттерди алып чыгып, магниттик мончокторду кайра суспензиялоо үчүн бир нече жолу айлантып, аралаштырыңыз.Реагенттер жана магниттик мончоктор кудуктун түбүнө чөгүш үчүн пластинканы акырын чайкаңыз.Сураныч, плитанын багытын ырастап, мөөр басуучу алюминий фольганы кылдаттык менен үзүп салыңыз.
Δ Суюктуктун төгүлүшүнө жол бербөө үчүн пломбаны үзүп жатканда титирөөдөн сактаңыз.
3. Иштетүү автомататикалык аспап
3.1 96 терең скважинанын 1 же 7-графасындагы скважиналарга 300 мкл үлгүнү кошуңуз (эффективдүү иштөөчү скважинанын абалына көңүл буруңуз).Үлгүнүн киргизүү көлөмү 100-400 мкл менен шайкеш келет.
3.2 Нуклеиндик кислоталарды экстракторго 96 скважиналуу терең скважинаны салыңыз.Магниттик тилкенин жеңдерин кийиңиз жана алардын магнит таякчаларын толугу менен ороп алышын камсыз кылыңыз.
3.3 Автоматтык түрдө алуу үчүн программаны төмөнкүдөй орнотуңуз:
3.4 Экстракциядан кийин элюентти 96 терең скважинанын 6 же 12-графаларынан (эффективдүү иштөөчү скважинанын абалына көңүл буруңуз) таза нуклеазасыз центрифуга түтүгүнө өткөрүңүз.Эгер дароо колдонбосоңуз, продуктуларды -20℃ температурада сактаңыз.
Эскертүүлөр
изилдөө үчүн гана.Диагностикалык процедураларда колдонуу үчүн эмес.
1. Алынган продукт ДНК/РНК болуп саналат.Операция учурунда РНКнын RNase тарабынан бузулушуна жол бербөөгө өзгөчө көңүл буруу керек.Колдонулган идиш-аяктар жана үлгү алгычтар арналышы керек.Бардык түтүктөр жана пипеткалардын учтары стерилденген жана DNase/RNase жок болушу керек.Операторлор порошоксуз кол кап жана беткап кийиши керек.
2. Сураныч, колдонуудан мурун, кылдаттык менен нускама китепчесин окуп, жана нускама боюнча так ылайык иш.Үлгүлөрдү иштетүү өтө таза отургучта же биологиялык коопсуздук кабинетинде жүргүзүлүшү керек.
3. Автоматтык нуклеин кислотасын экстракциялоо системасы колдонуудан мурун жана андан кийин 30 мүнөт UV менен дезинфекцияланышы керек.
4. Экстракциядан кийин элюентте магниттик мончоктордун издери калышы мүмкүн, андыктан магниттик мончокторду соруп албаңыз.Эгерде магниттик мончоктор аспирацияланса, аны магниттик стенд менен алып салууга болот.
5. Эгерде реагенттердин ар кандай партиялары үчүн атайын көрсөтмөлөр жок болсо, аларды аралаштырбаңыз жана комплекттердин жарактуу мөөнөтүнүн ичинде колдонулушун текшериңиз.
6. Бардык үлгүлөрдү жана реагентти туура жок кылыңыз, бардык жумушчу беттерди 75% этанол менен жакшылап сүртүңүз жана дезинфекциялаңыз.
