Протеиназа К (суюктук)
Cat №: HC4502A
Proteinase K кең субстрат өзгөчөлүгү менен туруктуу серин протеаза болуп саналат.Ал жуучу каражаттар болгон учурда да эне абалында көптөгөн белокторду бузат.Кристаллдык жана молекулярдык түзүлүштү изилдөөлөрдөн алынган далилдер ферменттин субтилизин үй-бүлөсүнө таандык экенин көрсөтүп турат (Asp)39- Анын69- Сер224).Бөлүнүүнүн басымдуу жери - блоктолгон альфа-амин топтору бар алифаттык жана ароматтык аминокислоталардын карбоксил тобуна чектеш пептиддик байланыш.Ал, адатта, анын кенен үчүн колдонулатөзгөчөлүк.
Спецификация
| Көрүнүш | Түссүздөн ачык күрөңгө чейинки суюктук |
| Активдүүлүк | ≥800 U/мл |
| Белоктун концентрациясы | ≥20 мг/мл |
| DNase | Эч ким табылган жок |
| RNase | Эч ким табылган жок |
Сактоо шарттары
2-8°С температурада сактаңыз.
Properties
| EC номери | 3.4.21.64 (RTritirachium альбомунан экокомбинант) |
| Молекулярдык салмак | 29 кДа (SDS-PAGE) |
| Изоэлектрдик чекит | 7.81 |
| Оптималдуу рН | 7.0-12.0 Fig.1 |
| Оптималдуу температура | 65 ℃ 2-сүрөт |
| рН туруктуулугу | pH 4,5-12,5 (25℃, 16 ч) 3-сүрөт |
| Термикалык туруктуулук | 50℃ төмөн (рН 8,0, 30 мин) 4-сүрөт |
| Активаторлор | СДС, мочевина |
| Ингибиторлор | диизопропил фторофосфат;фенилметилсульфонил фториди |
Тиркемелер
1. Генетикалык диагностикалык комплект
2. РНК жана ДНК экстракциялоо комплекттери
3. Ткандардан белок эмес компоненттерди экстракциялоо, ДНК вакциналары сыяктуу белок аралашмаларын бузуу жана гепаринди даярдоо
4. Импульстук электрофорез аркылуу хромосоманын ДНКсын даярдоо
5. Western blot
6. In vitro диагностикасы үчүн ферменттик гликозилденген альбумин реагенттери
Cактык чаралары
Колдонууда же таразалоодо коргоочу кол каптарды жана көз айнектерди кийиңиз жана колдонгондон кийин жакшы желдетип туруңуз.Бул продукт теринин аллергиялык реакциясын жана олуттуу көздүн кыжырдануусун жаратышы мүмкүн.Дем алган болсо, ал аллергия же астма симптомдорун же дем алуусун келтириши мүмкүн.Дем алуу органдарынын кыжырдануусун пайда кылышы мүмкүн.
Талдоо
Бирдиктин аныктамасы
Бир бирдик (U) төмөнкү шарттарда мүнөтүнө 1 мкмоль тирозин өндүрүү үчүн казеинди гидролиздөө үчүн зарыл болгон ферменттин көлөмү катары аныкталат.
Реагенттерди даярдоо
I реагент: 1 г сүт казеин 50 мл 0,1 М натрий фосфат эритмесинде (рН 8,0) эритилип, 65-70 ℃ сууда 15 мүнөт инкубацияланды, аралаштырылды жана эритилди, суу менен муздатылды, натрий гидроксиди менен pH8,0ге чейин жөнгө салынып, бекитилди. көлөмү 100мл.
II реагент: TCA эритмеси: 0,1М трихлорасетат кислотасы, 0,2М натрий ацетаты, 0,3М уксус кислотасы.
Реагент III: 0,4M Na2CO3чечим.
IV реагент: Форинт реагенти таза суу менен 5 жолу суюлтулган.
V реагент: Фермент эриткичи: 0,1 М натрий фосфат эритмеси (рН 8,0).
VI реагент: Тирозин эритмеси: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 умол/мл тирозин 0,2М HCl менен эриген.
Процедура
1. 0,5 мл реагент I 37 ℃ чейин алдын ала жылытылат, 0,5 мл фермент эритмесин кошуп, жакшылап аралаштырыңыз жана 37 ℃ температурада 10 мүнөт инкубациялаңыз.
2. Реакцияны токтотуу үчүн 1 мл реагент II кошуп, жакшылап аралаштырып, 30 мүнөт инкубациялоону улантыңыз.
3. Реакция эритмесин центрифугалоо.
4. 0,5 мл супернатантты алып, 2,5 мл реагент III, 0,5 мл реагент IV кошуп, жакшылап аралаштырыңыз жана 37℃ температурада 30 мүнөткө инкубациялаңыз.
5. ОД660ОД деп аныкталган1;бош башкаруу тобу: 0,5 мл реагент V OD аныктоо үчүн фермент эритмесин алмаштыруу үчүн колдонулат660катары OD2, ΔOD=OD1-OD2.
6. L-тирозиндин стандарттык ийри сызыгы: 0,5 мл ар кандай концентрациядагы L-тирозин эритмеси, 2,5 мл реактив III, 5 мл центрифугалык түтүктөгү 0,5 мл реагент IV, 37 ℃ температурада 30 мүнөт инкубациялоо, OD үчүн аныктоо660L-тирозиндин ар кандай концентрациясы үчүн, андан кийин Y=kX+b стандарттык ийри сызыгы алынган, мында Y L-тирозин концентрациясы, X – OD600.
Эсептөө
2: Реакция эритмесинин жалпы көлөмү (мл)
0,5: Фермент эритмесинин көлөмү (мл)
0,5: хромогендик аныктоодо колдонулган суюктуктун реакциясынын көлөмү (мл)
10: Реакция убактысы (мин)
Df: Көп суюлтуу
C: Фермент концентрациясы (мг/мл)
Шилтемелер
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Биофиз.Res.Коммун.(1971);44:513.
3. Хилз, Х.жана башкалар.,евро.J. Биохим.(1975);56:103–108.
4. Сэмбрук Джet ал., Молекулярдык клондоо: лабораториялык колдонмо, 2-басылышы, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor (1989).
Фигуралар
Fig. 1 Оптималдуу pH
100мМ буфердик эритме: pH6.0-8.0, Na-фосфат;pH8.0- 9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5, Глицин-NaOH. Фермент концентрациясы: 1мг/мл
2-сүрөт Оптималдуу температура
20мМ К-фосфат буфериндеги реакция pH 8.0.Фермент концентрациясы: 1мг/мл
3-сүрөт рН Туруктуулук
25℃, 50mM буфердик эритмеси менен 16 ч. дарылоо: рН 4,5-5,5, Ацетат;рН 6,0-8,0, Na-фосфат;pH 8.0-9.0, Tris-HCl.рН 9,0-12,5, Глицин-NaOH.Фермент концентрациясы: 1мг/мл
4-сүрөт Жылуулук туруктуулук
50mM Tris-HCl буфери, рН 8.0 менен 30 мин-дарылоо.Фермент концентрациясы: 1мг/мл
5-сүрөт Сактоо туруктууty at 25℃
