Температурага сезгич UNG
Температурага сезгич UNG (TS-UNG) - E. coliдеги рекомбинантты туюнтма аркылуу алынган.Фермент урацил камтыган бир жана эки тилкелүү ДНКдан бош урацилдин бөлүнүп чыгышын катализдейт жана РНКга каршы активдүү эмес.E. coli генинин кадимки UNG ферментине салыштырмалуу, TS-UNG ферменти төмөнкү температурада (20℃~37℃) жогорку активдүүлүккө ээ жана температурага сезгич жана оңой активдештирүү эмес (50℃), dUTP камтыган күчөтүүнүн бузулушунан сактайт. буюмдарды бөлмө температурасында кадимки UNG ферменти инактивациялангандан кийин калышы мүмкүн болгон калдык активдүүлүк менен түзөт.Ошондуктан, TS-UNG ферменти ПТР булганышын алдын алуу реакциясы үчүн гана ылайыктуу эмес, ошондой эле RT-PCR күчөтүү программасы менен жакшы дал келет жана RT-PCR булганышын алдын алуу реакциясында колдонулушу мүмкүн.
Сунушталган Колдонмо
Контаминациянын алдын алууну күчөтүү
Сактоо абалы
Узак мөөнөттүү сактоо үчүн -20°C, колдонуудан мурун жакшылап аралаштыруу керек, тез-тез тоңуп-эрүүдөн сактануу керек.
Сактоочу буфер
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
Бирдиктин аныктамасы
dU негиздерин камтыган 1 мкг бир тилкелүү ДНКны 37°Cде 1 саатта деградациялоо үчүн зарыл болгон ферменттин көлөмү 1 активдүүлүк бирдигине (U) барабар.
Сапатты көзөмөлдөө
1.SDS-PAGE электрофоретикалык тазалыгы 98% дан жогору
2.Деградация активдүүлүгү, партиядан партияга башкаруу, туруктуулук
3.Экзогендик нуклеаза активдүүлүгү, экзогендик эндонуклеаза же экзонуклеаза булгануусу жок.
Instructions
| Компоненттер | Көлөмү (мкл) | Акыркы концентрация |
| 10 × ПТР буфери (dNTP акысыз, Mg²+бекер) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 мкм |
| dUTP (dTTP алмаштыруу) | - | 200-600 мкм |
| 25 мМ MgCl2 | 2-8 мкл | 1-4 мм |
| 5 U/μL Так | 0,25 | 1.25 У |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5U) |
| 25 × Primer Mixа | 2 | 1× |
| Шаблон | - | ＜1μg/реакция |
| ddH₂O | 50гө чейин | - |
Эскертүү: а: qPCR/qRT-PCR үчүн колдонулса, флуоресценттик зонд реакция системасына кошулушу керек.Адатта, 0,2 мкм акыркы праймер концентрациясы жакшы натыйжаларды бере алат;реакциянын натыйжалуулугу начар болгондо, праймердин концентрациясын 0,2-1 мкм диапазондо жөнгө салууга болот.Адатта, зонд концентрациясы 0,1-0,3 мкм диапазондо оптималдаштырылган.Пример менен зонддун эң жакшы айкалышын табуу үчүн концентрация градиентинин эксперименттерин жүргүзүүгө болот.
Эскертүүлөр
1.TS-UNG ферментинин оптималдуу реакция температурасы салыштырмалуу төмөн жана аны 20℃~37℃ диапазондо оптималдаштырса болот, ферменттин дозасын жана реакция убактысын 0,1~0,5 U, 5~ диапазондо оптималдаштырса болот. 10 мүнөт;ал эми фермент тескери транскрипция процессинде инактивацияланышы мүмкүн.
2.Бул булгануунун алдын алуу үчүн ПТР жана RT-ПЦР үчүн ылайыктуу.
3.Тез-тез тоңуп-эрүүдөн качыңыз жана температуранын чоң өзгөрүүсүнө дуушар болбоңуз.
4.Күчөтүлө турган ар кандай гендердин dUTP колдонуу эффективдүүлүгү жана UNG ферментине сезгичтиги ар кандай болот, ошондуктан, эгерде UNG тутумун колдонуу аныктоо сезгичтигинин төмөндөшүнө алып келсе, реакция системасы оңдолуп, оптималдаштырылышы керек, эгер сизге техникалык колдоо керек болсо, кайрылыңыз. биздин компания.
