Рнасе А
Рибонуклеаза A(RNaseA) – молекулалык салмагы болжол менен 13,7 кДа болгон 4 дисульфиддик байланышты камтыган бир тилкелүү полипептид.RNase A - бул C жана U калдыктарында бир катарлуу РНКны атайын деградациялоочу эндорибонуклеаза.Тактап айтканда, бөлүнүү нуклеотиддин 5'-рибозасы жана жанаша пиримидин нуклеотидинин 3'-рибозасындагы фосфат тобу тарабынан түзүлгөн фосфодиэстер байланышын тааныйт, ошентип 2,3'-циклдик фосфаттар тиешелүү 3 ге гидролизденет. 'нуклеозид фосфаттары (мисалы, pG-pG-pC-pA-pG pG-pG-pCp жана A-PG генерациялоо үчүн RNase А тарабынан бөлүнөт).RNase A бир катарлуу РНКны ажыратууда эң активдүү.Сунушталган жумушчу концентрациясы 1- 100 μ Г/мл, ар кандай реакция системалары менен шайкеш келет.Төмөн туз концентрациясы (0-100 mM NaCl) РНК-ДНК гибриддештирүү жолу менен түзүлгөн бир тилкелүү РНК, эки тилкелүү РНК жана РНК чынжырларын кесүү үчүн колдонулушу мүмкүн.
Бирок, туздун жогорку концентрациясында (≥0,3 М), RNase A бир катарлуу РНКны атайын ажыратат.
RNase A көбүнчө плазмиддик ДНКны же геномдук ДНКны даярдоо учурунда РНКны алып салуу үчүн колдонулат.Даярдоо процессинде DNase активдүү болобу же жокпу, реакцияга оңой таасир этиши мүмкүн.Суу мончодо кайнатуу салттуу ыкмасы DNase ишин inactivate үчүн колдонсо болот.Бул продукт DNase жана протеазаны камтыбайт жана колдонуудан мурун жылуулук дарылоону талап кылбайт.Мындан тышкары, бул продукт RNase коргоо талдоо жана РНК ырааттуулугун талдоо сыяктуу молекулярдык биология эксперименттеринде да колдонулушу мүмкүн.
Сактоо шарттары
Продукт -25℃~-15℃ температурада 2 жыл сакталышы керек.
Техникалык шарттар
| Көрүнүш | Порошок |
| Саны | 100 мг / 1 г |
| Продукт түрү | RNase A |
Instructions
Бул RNase A сактоо чечим даярдоо үчүн жалпы ыкмаларынын бири болуп саналат.Аны да даярдаса болотлабораториялык же маалымдама адабияттардагы салттуу методдорго ылайык башка ыкмалар менен (мисалы10 мМ Tris-HCl, pH 7,5 же Tris-NaCl эритмесинде түздөн-түз эрийт)
1. 10 мг/мл RNase A сактоо эритмесин даярдоо үчүн 10 мМ натрий ацетатын (рН 5,2) колдонуңуз.
2. 15 мүнөт 100 ℃ жылытуу.
3. Бөлмө температурасына чейин муздатып, 1/10 көлөмүндө 1 М Tris-HCl (рН 7,4) кошуп, анын pH деңгээлин 7,4кө тууралаңыз (үчүнмисалы, 500 мл 10 мг/мл RNase сактоо эритмеси 1 M Tris-HCl, pH7.4) кошуу.
4. 2 жылга чейин туруктуу болушу мүмкүн тоңдурулган сактоо үчүн -20 ℃ боюнча суб-пакеттелген.
[Эскертүү]:
Нейтралдуу шарттарда RNaseA эритмесин кайнатканда, RNase чөкмөлөрү пайда болот;Аны азыраак рН менен кайнатыңыз, эгерде жаан-чачындар болсо, анда белок аралашмаларынын болушу менен шартталган болушу мүмкүн.Эгерде чөкмө кайнагандан кийин табылса, аралашмалар жогорку ылдамдыкта центрифугалоо (13000 айн/мин) жолу менен алынып, андан кийин тоңдурулган сактоо үчүн субпакетке салынышы мүмкүн.
Эскертүүлөр
Сураныч, ден соолукту жана коопсуздугуңузду камсыз кылуу үчүн керектүү ЖККны, лабораториялык халатты жана кол каптарды кийиңиз.
