Wild Taq ДНК полимераза
Так ДНК Полимераза - бул Thermus aquaticus YT-1ден чыккан термостурдук ДНК полимераза, ал 5′→3′ полимераза активдүүлүгүнө жана 5′ флап эндонуклеаза активдүүлүгүнө ээ.
Компоненттер
| Компонент | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq буфери | 2×1 мл | 2×10 мл | 2×50 мл | 5×200 мл |
| Так ДНК Полимераза (5 U/мкл) | 0,1 мл | 1 мл | 5 мл | 5×10 мл |
Сактоо абалы
0 ° C астында ташуу жана -25 ° C ~ -15 ° C сакталат.
Бирдиктин аныктамасы
Бир бирдик 75°С температурада 30 мүнөттө кислотада эрибеген материалга 15 нмоль dNTP киргизген ферменттин саны катары аныкталат.
Сапатты көзөмөлдөө
1.Белоктун тазалыгынын анализи (SDS-PAGE):Taq ДНК полимеразасынын тазалыгы SDS-PAGE анализи менен ≥95% аныкталды.
2.Endонуклеаза активдүүлүгү:37 ℃ температурада 16 саат бою 1 мкг λДНК менен эң аз 5 U Taq ДНК полимеразасы аныкталгандай деградацияга алып келбейт.
3.Экзонуклеазанын активдүүлүгү:1 мкг λ -Hind Ⅲ сиңирүү ДНКсы менен 5 U кем эмес Так ДНК полимеразасы 37 ℃ температурада 16 саат бою аныкталгандай деградацияга алып келбейт.
4.Nickase Activity:37°C температурада 16 саат бою 1 мкг pBR322 ДНК менен эң аз 5 U Taq ДНК полимеразасы аныкталгандай эч кандай деградацияга алып келбейт.
5.RNase Activity:37°C температурада 16 саат бою 1,6 мкг MS2 РНК менен эң аз 5 U Taq ДНК полимеразасы аныкталгандай деградацияга алып келбейт.
6.E. coliДНК:5 U Taq ДНК полимеразасы E. coli 16S рРНК локусу үчүн спецификалык праймерлер менен TaqMan qPCR аркылуу E. coli геномдук ДНКсынын бар-жогуна текшерилет.E. coli геномдук ДНК булганышы ≤1 копия болуп саналат.
7.ПТР күчөтүү (5,0 кб Ламбда ДНК)- ПТР күчөтүүнүн 25 цикли үчүн 5 бирдик Так ДНК Полимераза менен 5 нг Ламбда ДНКсын камтыган 50 мкл реакция күтүлгөн 5,0 кб продуктту берет.
Reaction Setup
| Компоненттер | Көлөм |
| Үлгү ДНКa | кошумча |
| 10 μM Forward Primer | 1 мкл |
| 10 мкм тескери праймер | 1 мкл |
| dNTP Mix (ар бири 10мМ) | 1 мкл |
| 10×Taq буфери | 5 мкл |
| Так ДНК полимеразаб | 0,25 мкл |
| Нуклеазсыз суу | 50 мкл чейин |
Эскертүүлөр:
1) Ар кандай калыптардын оптималдуу реакция концентрациясы ар кандай.Төмөнкү таблица 50 мкл реакция системасынын сунушталган үлгүсүн көрсөтөт.
| ДНК | Суммасы |
| Геномиялык | 1 нг-1 мкг |
| Плазмиддик же вирустук | 1 pg-1 нг |
2) Так ДНК Полимеразанын оптималдуу концентрациясы адистештирилген колдонмолордо 0,25 мкл~1 мкл чейин өзгөрүшү мүмкүн.
РеакцияПрограмма
| Кадам | Температура(°C) | Убакыт | Циклдер |
| Баштапкы денатурацияa | 95 ℃ | 5мин | - |
| Денатурация | 95 ℃ | 15-30 с | 30-35 Циклдер |
| Жылуулооб | 60 ℃ | 15 с | |
| Кеңейтүү | 72 ℃ | 1кб/мүнөт | |
| Акыркы узартуу | 72 ℃ | 5мин | - |
Эскертүүлөр:
1) Денатурациянын баштапкы шарты көпчүлүк күчөтүү реакциялары үчүн ылайыктуу жана калыптын түзүлүшүнүн татаалдыгына жараша өзгөртүлүшү мүмкүн.шаблон структурасы татаал болсо, алдын ала денатурация убакыт 5 чейин узартылышы мүмкүн - 10mins баштапкы денатурация таасирин жакшыртуу.
2) Жылдыруу температурасын праймердин Tm маанисине ылайык тууралоо керек, ал негизинен праймердин Tm маанисинен 3~5 ℃ төмөн коюлат;Татаал шаблондор үчүн эффективдүү күчөтүүгө жетишүү үчүн күйгүзүү температурасын тууралоо жана узартуу убактысын узартуу керек.
